Question

以下是有关现代生物科技的两个问题，请回答：
Ⅰ．动物细胞培养技术是动物细胞工程的基础，在动物细胞工程的其他技术中都得到广泛应 用，例如：提供供体细胞进行核移植；制备单克隆抗体等等．下面是与动物细胞工程有关的问 题，请分析回答：
（1）在进行动物细胞培养时，首先要将动物组织剪碎，然后用

 

处理，以使其分散成单个细胞，制成细胞悬液．
（2）气体环境中CO₂的作用是

 

．
（3 ）应用于核移植的供体细胞一般选用传代10代以内的细胞，原因是10代以后细胞可能发生

 

（4）单克隆抗体与常规抗体相比，具有

 

的特点．
Ⅱ转基因抗病香蕉的培育过程如下图所示．图中PstI、SmaI、EcoRI，ApaI等为限制酶，质粒和抗病基因上的箭头表示限制酶的切割位点．下图表示四种限制酶的识别序列及酶切点．

限制酶	PstI	SmaI	EcoRI	ApaL
识别序列及酶切位点

（1）若要获得抗病基因，能否用限制酶SmaI对图中对应的位点进行切割？

 

．
要获得含抗病基因的重组质粒能否用PstI、ApaI限制酶切割质粒？

 

．
（2）卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，根据这一原理可以利用含卡3卩霉素的培养基筛选已导入重组质粒的香蕉细胞．由此推断重组质粒中应含有

 

基因，作为标记基因．
（3）②、③阶段是否可使用同种培养基？

 

．

Answer 1

考点：动物细胞与组织培养过程,基因工程的原理及技术

专题：

分析：1、动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养．
2、动物细胞培养需要满足以下条件：①无菌、无毒的环境；②营养；③温度和pH；④气体环境：95%空气+5%CO2．
3、分析题图：含抗病基因的DNA含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位点，其中SmaⅠ酶的切割位点位于抗病基因（目的基因）上；质粒含有限制酶PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ的切割位点．所以要活动重组质粒，可以用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ进行切割．①→②表示脱分化过程、②→③表示再分化过程、④是新植体．

解答： 解：Ⅰ．（1）在进行动物细胞培养时，首先要将动物组织剪碎，然后用胰蛋白酶处理，以使其分散成单个细胞，制成细胞悬液．
（2）气体环境中CO₂的作用是维持培养液中的pH．
（3）应用于核移植的供体细胞一般选用传代10代以内的细胞，原因是10代以后细胞可能发生遗传物质的突变（遗传物质的改变）．
（4）单克隆抗体与常规抗体相比，具有特异性强、灵敏度高的特点．
Ⅱ．（1）因为限制酶SmaⅠ的切割位点位于抗病基因上，对SmaⅠ位点进行切割破坏了抗病基因的结构，所以要获得抗病基因，不能否用限制酶SmaⅠ对图中对应的位点进行切割．要获得含抗病基因的重组质粒，也不能否用PstⅠ、ApaⅠ限制酶切割质粒，因为含有抗病基因的外源DNA分子上没有ApaⅠ限制酶切割位点．
（2）欲利用含卡那霉素的培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，重组质粒中应同时含有抗卡那霉素基因，作为标记基因．
（3）决定植物脱分化和再分化的关键因素是植物激素的种类和比例，特别是生长素和细胞分裂素的协同作用在组织培养过程中非常重要．②、③阶段培养基中生长素与细胞分裂素的比值不同，因此这两个阶段不能是用同种培养基．
故答案为：
Ⅰ．（1）胰蛋白酶
（2）维持培养液中的pH
（3）遗传物质的突变（遗传物质的改变也可）
（4）特异性强、灵敏度高
Ⅱ．（1）不能        不能
（2）抗卡那霉素 
（3）不能

点评：本题考查了动物细胞培养技术，结合转基因抗病香蕉的培育过程图考查了基因工程和植物组织培养技术的相关知识，意在考查考生的识图能力和理解所学知识要点的能力；能运用所学知识与观点，对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论．