Question

13．每生物兴趣小组为了探究土壤中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）．培养基成分如下表所示，实验步骤表格所示．请分析回答问题：

KH2PO4	1.4g
Na2HPO4	2.1g
MgSO4•7H2O	0.2g
葡萄糖	1g
尿素	10g
琼脂	15g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000mL

（1）简述土壤中可分解尿素的细菌的鉴定方法及原理：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，pH升高，使指示剂变为红色．
（2）培养基中加入尿素的目的是筛选目的菌，这种培养基属于选择培养基．
（3）“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的尿素和葡萄糖，实验中需要振荡培养，原因是为目的菌提供氧气．
（4）图1是利用平板划线法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面．通常还可以稀释涂布平板法 方法分离到一个细胞繁殖形成的菌落
（5）关于图1的操作方法和结果，叙述正确的是ABCD．
A．操作时要将接种环放在火焰上灼烧灭菌
B．划线操作须在火焰旁进行
C．多次划线后培养才可以分离到一个细胞繁殖形成的菌落
D．在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌

Answer 1

分析 1、尿素分解菌体内的脲酶能够把尿素分解为氨使pH升高，与酚红指示剂反应后呈红色．筛选尿素分解菌要使用一尿素为唯一氮源的选择培养基，筛选分离时常用稀释涂布平板法和平板划线法．
2、平板划线的操作的基本步骤是：
（1）右手持接种环，经火焰灭菌，待凉后，在火焰旁打开盛有菌液的试管棉塞，并将试管口过火焰，将以冷却的接种环伸入菌液，沾取一环菌液，将试管口过火焰丙塞上棉塞．
（2）左手斜持琼脂平板，皿盖打开一条缝，右手于火焰近处將接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖，接种环不应划破培养基表面．
（3）烧灼接种环，杀灭环上残留菌液，待冷却（是否冷却，可先在培养基边缘处试触，若琼脂溶化，表示未凉，稍等再试），从第一区域划线的末端开始往第二区内划线，重复以上操作，在第三四五区内划线，注意不要将最后一区的划线与第一区相连．
（4）将平板倒置，放入培养箱中培养．

解答 解：（1）尿素分解菌体内的脲酶能够把尿素分解为氨使pH升高，与酚红指示剂反应后呈红色．
（2）培养基中加入尿素的目的是只有尿素分解菌能够以尿素为氮源进行利用，而其他微生物不能利用，使用尿素分解菌属于目的菌，该培养基属于选择培养基．
（3）尿素分解菌所需要的氮源是尿素，碳源是培养基中的葡萄糖．尿素分解菌的代谢类型是异养需氧型，所以实验中需要振荡培养为其提供更多的氧气．
（4）固体培养基上的接种方法主要有稀释涂布平板法和平板划线法．图1为利用平板划线法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面．通常还可以用稀释涂布平板法分离到一个细胞繁殖形成的菌落．
（5）A、在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧，A正确；
B、接种时划线操作是在火焰周围进行，防止杂菌污染，B正确；
C、多次划线后细胞分离，培养才可以分离到一个细胞繁殖形成的菌落，C正确；
D、在1、2、3、4区域中划线前都要对接种环进行灼烧灭菌，保证每次划线的菌种来自上一区域的末端，5区域划线前都要对接种环进行灼烧灭菌目的是防止杂菌污染，1区域划线后进行灼烧灭菌是防止污染环境及操作者，D正确．
故选：ABCD．
故答案为：
（1）酚红　脲酶　氨
（2）选择
（3）尿素　葡萄糖　为目的菌提供氧气
（4）平板划线　 稀释涂布平板法
（5）ABCD

点评 本题主要考查平板划线法的操作步骤及摘要事项，意在提高学生实验中无菌操作意识和相关实验技能．