Question

（1）过程①所需要的酶是　　　　　。

（2）在构建基因表达载体过程中，应用限制性核酸内切酶　　 　切割质粒，用限制性核酸内切酶　 　 切割目的基因。用限制酶切割目的基因和运载体后形成的黏性末端通过___________　　 原则进行连接。人的基因之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组，原因是　　　　 　　　　 。

（3）在过程③一般将受体大肠杆菌用_________处理，以增大　　　　　的通透性，使含有目的基因的重组质粒容易进入受体细胞。

（4）将得到的大肠杆菌B涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上得到如下图a的结果（黑点表示菌落），能够生长的细菌中已导入了　　　　　　 ，反之则没有导入；再将灭菌绒布按到培养基a上，使绒布表面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图b的结果（空圈表示与a对照无菌落的位置）。与图b空圈相对应的图a中的菌落表现型是　　　　　　　　 ，这些细菌中导入了________________。

（5）人体的生长激素基因能在细菌体内成功表达是因为　　　　　　　　　　　　 。写出目的基因导入细菌中表达的过程　　　　　　　　　　　　　　　　　　 。

Answer 1

【答案】 29、（1）逆转录酶　　（2）I　　II  　碱基互补配对　　人的基因与大肠杆菌DNA双螺旋结构相同　　（3）CaCl₂　  细胞壁　　（4）普通质粒或重组质粒  　抗氨苄青霉素和四环素抗性　　重组质粒　　（5）共用一套密码子   生长激素基因——>mRNA——>生长激素

【解析】（1）目的基因的获取途径有三条，从图中可以明显地看出，是通过逆转录法这一人工合成法来获取的，过程①是逆转录过程，需要逆转录酶。

（2）由图看以看出在质粒中基因Ⅱ的位置插入的目的基因，只能用限制性核酸内切酶Ⅰ切割质粒，如果使用限制性核酸内切酶Ⅱ切割的话，在质粒的基因Ⅰ的位置也会切割；目的基因的两端都要切割，所以应该选择限制性核酸内切酶Ⅱ切割。用限制酶切割目的基因和运载体后形成的黏性末端通过碱基互补配对原则进行连接。人的基因之所以能与大肠杆菌的DNA分子进行重组，原因是人的基因与大肠杆菌DNA双螺旋结构相同。人的生长激素基因与大肠杆菌的DNA分子进行重组，说明人的基因与大肠杆菌DNA的双螺旋结构相同，即基因是生物遗传物质的结构和功能的基本单位。根据限制酶的专一性特点，可知在构建基因表达载体过程中，应用限制酶Ⅰ切割质粒，用限制酶Ⅱ酶切割目的基因。

（3）将目的基因导入到细菌细胞中的方法是钙离子处理法，使其细胞壁通透性增强，便于将目的基因形成的重组DNA分子进入。

（4）在氨苄青霉素的培养基上能形成菌落的，说明导入了普通质粒或重组质粒，再在含有四环素的培养基上培养，得到如图b的结果（空圈表示与a对照无菌落的位置）。与图b空圈相对应的图a中的菌落表现型，形成菌落是含有抗氨苄青霉素和四环素抗性，不能形成菌落的是含有重组质粒的细菌。

（5）其目的基因能成功地在大肠杆菌中得以表达，则说明人和细菌等生物共用一套（遗传）密码子。其表达的过程是：人的生长激素基因，通过转录形成信使RNA；再通过翻译，形成人的生长激素。其场所在细菌体内，所用的核苷酸和氨基酸等原料均来自于细菌体内。目的基因在受体细胞内表达原因是共用一套完全相同的密码子，目的基因表达过程为生长激素基因——> mRNA——>生长激素。