Question

10．如图所示是将某细菌的基因A导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的示意图．

请据图回答：
（1）制备“工程菌”的基本操作程序主要包括四个步骤，其中的核心步骤是构建重组DNA分子．
（2）若A为未知的目的基因，获得A常用的方法是建立（一个包括目的基因在内的）基因文库．
（3）A、B形成C的过程中，需要的工具酶有限制性核酸内切酶和DNA连接酶．为了利于C进入D，常用CaCl₂溶液（或Ca²⁺）处理D．
（4）制备所得的“工程菌”用LB液体培养基进行扩大培养，操作过程中要用蛋白胨和酵母提取物来配制该培养基，还要加入一定量的氯化钠，以维持一定的渗透压；培养基使用前必须用高压蒸汽灭菌法进行灭菌处理．

Answer 1

分析 分析题图：图示是将某细菌的基因A导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的示意图，其中A为目的基因，B为运载体（质粒），C为重组质粒，D为受体细胞．

解答 解：（1）基因工程的操作步骤包括：目的基因的获取、基因表达载体的构建、目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和鉴定，其中基因表达载体的构建（构建重组DNA分子）是基因工程的核心步骤．
（2）若A为未知的目的基因，获得A常用的方法是建立（一个包括目的基因在内的）基因文库．
（3）目的基因、质粒形成重组质粒的过程中，需要的工具酶有限制性核酸内切酶和DNA连接酶．为了利于重组质粒进入受体细胞，并且受体细胞为微生物，常用CaCl₂溶液（或Ca²⁺）处理D，使D处于感受态．
（4）制备所得的“工程菌”用LB液体培养基进行扩大培养，操作过程中要用蛋白胨和酵母提取物来配制该培养基，还要加入一定量的氯化钠，以维持一定的渗透压；培养基使用前必须用高压蒸汽灭菌法进行灭菌处理．
故答案为：
（1）构建重组DNA分子
（2）建立（一个包括目的基因在内的）基因文库
（3）限制性核酸内切酶  DNA连接酶；CaCl₂溶液（或Ca²⁺）
（4）液体培养基    蛋白胨  酵母提取物   氯化钠   高压蒸汽灭菌法

点评 本题结合制备“工程菌”的示意图，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握步骤中的相关细节，能结合所学的知识准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．