科研人员拟将已知的花色基因转人矮牵牛的核基因组中.培育新花色的矮牵牛．请回答:(1)为了获得大量的目的基因.将其与含有抗生素抗性基因的质粒DNA形成重组DNA.再与经A(A．氯化钙.B．氯化钠.C．蔗糖.D．葡萄糖)处理的大肠杆菌液混合.使重组DNA进入大肠杆菌．(2)从扩大培养的大肠杆菌中提取含有目的基因的DNA.用限制性核酸内切酶分别切割含目的� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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19．科研人员拟将已知的花色基因（目的基因）转人矮牵牛的核基因组中，培育新花色的矮牵牛．请回答：
（1）为了获得大量的目的基因，将其与含有抗生素抗性基因的质粒DNA形成重组DNA，再与经A（A．氯化钙、B．氯化钠、C．蔗糖、D．葡萄糖）处理的大肠杆菌液混合，使重组DNA进入大肠杆菌．
（2）从扩大培养的大肠杆菌中提取含有目的基因的DNA，用限制性核酸内切酶分别切割含目的基因的 DNA和农杆菌的Ti质粒，然后用DNA连接酶连接，形成重组DNA并导入农杆菌．
（3）取田间矮牵牛的幼嫩叶片，经自来水冲洗，先用70%酒精浸泡，再用5%次氯酸钠浸泡，最后用无菌水清洗，为转基因的受体材料消毒．
（4）将消毒后的矮牵牛叶片剪成小片，在含有目的基因的农杆菌溶液中浸泡后，取出并转移至加有适当配比生长调节剂的MS培养基（含蔗糖、琼脂和抗生素，下同）上，使叶小叶先脱分化形成愈伤组织．再将其转移至另一培养基诱导形成芽，芽切割后转移至B（A．LB培养基 B．MS培养基+适宜浓度NAA C．MS培养基+适宜浓度BA D．NAA/BA小于1的MS培养基）上生根，形成完整植株．
（5）取出试管苗，在适宜的光照、温度和80%以上的湿度等条件下进行炼苗．提取叶片组织的DNA，采用PCR技术扩增目的基因，鉴定目的基因是否成功导入．
（6）为判断本研究是否达到预期目的，可比较转基因植株和非转基因植株的花色性状．

分析基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答解：（1）将目的基因导入微生物细胞常用感受态转化法，即需要利用钙离子处理使受体细胞变成感受态细胞．因此，为了获得大量的目的基因，将其与含有抗生素抗性基因的质粒DNA形成重组DNA，再与经氯化钙处理的大肠杆菌液混合，使重组DNA进入大肠杆菌．
（2）基因工程的工具酶包括限制性核酸内切酶和DNA连接酶．
（3）取田间矮牵牛的幼嫩叶片，经自来水冲洗，先用70%酒精浸泡，再用5%次氯酸钠浸泡，最后用无菌水清洗，作为转基因的受体材料．
（4）将消毒后的矮牵牛叶片剪成小片，在含有目的基因的农杆菌溶液中浸泡后，取出并转移至加有适当配比生长调节剂的MS培养基（含蔗糖、琼脂和抗生素，下同）上，使叶小叶先脱分化形成愈伤组织．再将其转移至另一培养基诱导形成芽，芽切割后转移至MS培养基+适宜浓度NAA上生根，形成完整植株．
（5）取出试管苗，在适宜的光照、温度和80%以上的湿度等条件下进行炼苗．提取叶片组织的DN A，采用PCR技术扩增目的基因，鉴定目的基因是否成功导入．
（6）为判断本研究是否达到预期目的，可比较转基因植株和非转基因植株的花色性状．
故答案为：
（1）A
（2）限制性核酸内切酶    DNA连接酶
（3）酒精    无菌水
（4）愈伤组织    B
（5）湿度   扩增
（6）花色

点评本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及意义，掌握基因工程采用的工具及具体操作步骤，能结合所学的知识准确分析各题．

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