Question

我们日常吃的大米中铁含量极低，科研人员通过基因工程等技术，培育出了铁含量比普通大米高60%的转基因水稻，改良了稻米的营养品质。下图为培育转基因水稻流程示意图，请回答下列问题：

(l)铁结合蛋白基因来自菜豆，且基因的脱氧核苷酸序列已知，可以用             法获得此目的基因。
(2)构建重组Ti质粒时，通常要用             分别切割              和                   。
(3)将含有重组Ti质粒的农杆菌与水稻愈伤组织共同培养时，通过培养基2的筛选培养，可以获得               。
(4)为研究外源基因的遗传方式，将T。代植株上收获的种子种植成T₁，代株系，检测各单株的潮霉素抗性。在检测的多数T₁代株系内，抗潮霉素植株与潮霉素敏感植株的比例为3：1，此结果说明外源基因的遗传符合             定律。有少数T₁代株系的所有植株都表现为对潮霉素敏感，但其体内能检测到铁结合蛋白基因，造成这一结果最可能的原因是            。

Answer 1

（1）化学合成     （2）限制性核酸内切酶     含目的基因的DNA片段    质粒    （3）含有重组质粒（有潮霉素抗性）的愈伤组织       （4）基因分离   潮霉素抗性基因没有表达（或“潮霉素抗性基因丢失”）（2分）

解析试题分析：(l)获取目的基因的方法有三种：①从基因文库中获取 ②利用PCR技术扩增 ③人工合成（化学合成）。如果基因的脱氧核苷酸序列已知，可以用化学合成法获得此目的基因。
(2)构建重组质粒的过程中，通常要用同一种限制酶分别切割质粒和含目的基因的DNA片段，是它们产生相同的黏性末端，然后再用DNA连接酶连接成重组质粒。
(3)质粒上的标记基因为潮霉素抗性基因，因此通过培养基2的筛选培养，可以获得含有重组质粒的愈伤组织。
(4)细胞导入目的基因后，可将该细胞认为是携带目的基因的杂合子，自交后代中，抗潮霉素植株与潮霉素敏感植株的比例为3：1，此结果说明外源基因的遗传符合基因的分离定律。如果体内能检测到铁结合蛋白基因，而表现为对潮霉素敏感，最有可能的就是潮霉素抗性基因没有表达或者潮霉素抗性基因丢失。
考点：基因工程
点评：本题重在考查了基因工程中的操作步骤等方面的知识，属于对识记、理解层次的考查。