Question

12．为了调查某城市自来水的水质状况，某研究小组测定了自来水水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作．回答下列问题：
（1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量．涂布平板所用的培养基是固体（填“固体”或“液体”）培养基；该培养基的制备过程是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板．对培养基灭菌的方法是高压蒸汽灭菌．在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白培养基培养了一段时间，若空白培养基出现了菌落．请分析说明原因（写出二个）①培养基灭菌不合格②倒平板过程被污染（或培养皿灭菌不合格）．
（2）培养基灭菌后，将1mL水样稀释1000倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为51、50和49．据此可得出每升水样中的活菌数为5.0×10⁸．
（3）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌．操作时，每次划线之前都要灼烧接种环，目的是杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端．

Answer 1

分析 1、微生物常见的接种的方法：
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
2、划线分离操作中的有关问题：
（1）在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环，在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环．

	第一次灼烧	每次划线之前灼烧	划线结束灼烧
目的	避免接种环上可能存在的微生物污染培养基	杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种	杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染或感染操作者

②在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线，以免接种环温度太高，杀死菌种．
③在进行第二次以及其后的划线操作时'要从上一次划线的末端开始划线．每次划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落．
（2）进行恒温培养时，要将培养皿倒置的原因如果正放培养皿，则皿盖上形成的水滴会落入培 养基表面并且扩散开．如果培养皿中已形成菌落，则茵落中的细菌会随水扩散，菌落间相互影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的．因此恒温培养时，培养皿必须倒置．
（3）培养后判断是否有杂菌污染的方法
①从菌落的形态看，是否湿润、透明、黏稠，呈何种颜色等等，是区别细菌、酵母菌、放线菌和霉菌的关键指标．
②用显微镜镜检观察其形态、大小，看是否有菌丝、孢子、芽孢等，这也是区别细菌、酵母菌、放线菌和霉菌的关键指标．

解答 解：（1）涂布平板所用的培养基是固体培养基；该培养基的制备过程是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板．对培养基灭菌的方法是高压蒸汽灭菌．在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白培养基培养了一段时间，若空白培养基出现了菌落，其可能原因是：①培养基灭菌不合格；②倒平板过程被污染（或培养皿灭菌不合格）．
（2）培养基灭菌后，将1mL水样稀释1000倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为51、50和49．据此可得出每升水样（1L=1000mL）中的活菌数=$\frac{51+50+49}{3}×$1000×10×1000=5.0×10⁸．
（3）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌．操作时，每次划线之前都要灼烧接种环，目的是杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于 上次划线的末端．
故答案为：
（1）固体     计算、称量、溶化、灭菌、倒平板     高压蒸汽灭菌    培养基灭菌不合格     倒平板过程被污染（或培养皿灭菌不合格）
（2）5.0×10⁸  
（3）杀死上次划线后接种环上残留      上次划线的末端

点评 本题主要考查培养基的制作和微生物的接种方法，意在强化学生对实验室的微生物的培养的相关知识的理解与掌握．