Question

17．Graves病（GD）可导致甲状腺功能亢进．研究发现，GD患者甲状腺细胞表面表达大量细胞间粘附分子1（ICAM-1），导致甲状腺肿大．科研人员通过制备单克隆抗体，对治疗GD进行了尝试．
（1）用ICAM-1作为抗原间隔多次免疫若干只小鼠，几周后取这些免疫小鼠的血清，分别加入多孔培养板的不同孔中，多孔培养板中需加入ICAM-1以检测这些小鼠产生的抗体．依据反应结果，选出阳性反应最强的培养孔所对应的小鼠M．
（2）实验用骨髓瘤细胞置于（5%）CO₂恒温培养箱中37℃培养，融合前将部分培养细胞置于含HAT的选择性培养基中培养，一段时间后培养基中无（填“有”或“无”）骨髓瘤细胞生长，说明培养基符合实验要求．
（3）取小鼠M的脾脏细胞制备成细胞悬液，与实验用骨髓瘤细胞进行融合，用选择培养基筛选得到具有无限增殖能力的细胞．将获得的上述细胞在多孔培养板上培养，用ICAM-1检测，从中选择大量产生抗ICAM-1抗体的杂交瘤细胞，植入小鼠腹腔中克隆化培养，一段时间后从小鼠腹水中提取实验用抗体．
（4）若进一步比较实验用抗体和¹³¹I对GD模型小鼠的治疗作用，可将若干GD模型小鼠等分为三组，请补充下表中的实验设计．

对照组（A）	131I治疗组（B）	单克隆抗体治疗组（C）
给GD模型小鼠腹腔注射0.1mL无菌生理盐水	给GD模型小鼠腹腔注射溶于0.1mL无菌生理盐水的131I	给GD模型小鼠腹腔注射溶于0.1mL无菌生理盐水的抗ICAM-1单克隆抗体

Answer 1

分析 1、单克隆抗体：由单个B淋巴细胞进行无性繁殖形成的细胞系所产生出的化学性质单一、特异性强的抗体．具有特异性强、灵敏度高，并可能大量制备的特点．
2、单克隆抗体的制备过程：首先用特定抗原注射小鼠体内，使其发生免疫，小鼠体内产生具有免疫能力的B淋巴细胞．利用动物细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，单克隆抗体制备过程中的两次筛选：第一次筛选：利用特定选择培养基筛选，获得杂交瘤细胞，即AB型细胞（A为B淋巴细胞，B为骨髓瘤细胞），不需要A、B、AA、BB型细胞．第二次筛选：利用多孔板法和抗原-抗体杂交法筛选，获得产生特定抗体的杂交瘤细胞．

解答 解：（1）用ICAM-1作为抗原间隔多次免疫若干只小鼠，几周后取这些免疫小鼠的血清，分别加入多孔培养板的不同孔中，多孔培养板中需加入ICAM-1以检测这些小鼠产生的抗体．依据反应结果，选出阳性（或“抗原-抗体”）反应最强的培养孔所对应的小鼠M．
（2）实验用骨髓瘤细胞置于（5%）CO₂恒温培养箱中37℃培养，融合前将部分培养细胞置于含HAT的选择培养基中培养，一段时间后培养基中无骨髓瘤细胞生长，说明培养基符合实验要求．
（3）取小鼠M的脾脏细胞制备成细胞悬液，与实验用骨髓瘤细胞进行融合，用选择培养基筛选得到具有无限增殖能力的细胞．将获得的上述细胞在多孔培养板上培养，用ICAM-1检测，从中选择大量产生抗ICAM-1 抗体的杂交瘤细胞，植入小鼠腹腔中克隆培养，一段时间后从小鼠腹水中提取实验用抗体．
（4）根据题干中实验目的“比较实验用抗体和¹³¹I对GD 模型小鼠的治疗作用”，单克隆抗体治疗组（C）中应给GD模型小鼠腹腔注射溶于0.1mL无菌生理盐水的抗ICAM-1单克隆抗体．
故答案为：
（1）ICAM-1    阳性（或“抗原-抗体”）
（2）（5%）CO₂    无
（3）无限增殖      抗ICAM-1抗体    克隆化
（4）给GD模型小鼠腹腔注射溶于0.1mL无菌生理盐水的抗ICAM-1单克隆抗体

点评 本题考查了单克隆抗体的制备以及动物细胞培养的有关知识，要求考生能够识记单克隆抗体制备的过程，掌握两次筛选的方法原理，并能够利用对照实验的原则对实验进行补充设计，难度适中．