尿素是一种重要的农业肥料.需经细菌的分解才能更好地被植物利用．生活在土壤中的微生物种类和数量繁多.下列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题.请分析回答:(1)如图是利用平板划线法进行微生物接种.把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面．除此方法外.常用的微生物接种方法还有稀释涂布平板法．(2)如果要对培养的菌落进行纯化.在培养基上� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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尿素是一种重要的农业肥料，需经细菌的分解才能更好地被植物利用．生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题，请分析回答：
（1）如图是利用平板划线法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面．除此方法外，常用的微生物接种方法还有稀释涂布平板法（写一种）．
（2）如果要对培养的菌落进行纯化，在培养基上划线操作中，操作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环，目的是对接种环进行灭菌，灼烧的接种环冷却后才能接种的原因是防止高温杀死需接种的微生物．
（3）下面是两种培养基配方
表1：A培养基配方

KH₂PO₄	Na2HPO₄	MgSO4•7H₂O	葡萄糖	尿素	琼脂	H₂O
1.4g	2.1g	0.2g	10.0g	1.0g	15.0g	1000mL

表2：B培养基配方

纤维素粉	NaNO₃	Na₂HPO₄•7H₂O	KH₂PO₄	MgSO₄•7H₂O	KCl	酵母浸膏	H₂O
5g	1g	1.2g	0.9g	0.5g	0.5g	0.5g	1000mL

①配制培养基的操作步骤bdcea（用字母顺序回答）．
a．倒平板 b．计算 c．溶化 d．称量 e．灭菌
②通常培养基采用高压蒸汽灭菌法灭菌，在制备固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒置，目的是防止培养皿内壁上出现的冷凝水污染培养基．
③如果要分离土壤中能分解尿素的细菌，应选择上述A （A、B）配方的培养基，在该培养基中加入酚红指示剂，可初步鉴定出该种细菌能否分解尿素．
④据B培养基的成分，所培养微生物的同化作用类型是异养型．
（4）如果进一步从尿素分解菌中提取出DNA，利用PCR技术扩增，则每次循环复制可分为变性、复性和延伸三步．而尿素分解菌能分解尿素的直接原因是它们能合成脲酶，该物质被提取出后的纯化方法通常是凝胶色谱法．

分析 1、常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法．
2、常用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌和干热灭菌．
3、制备固体培养基的步骤是：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板．
4、如果要分离土壤中能分解尿素的细菌，应选择以尿素为唯一氮源的培养基；在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，PH增高，使指示剂变红色．
5、PCR技术的原理是体外DNA的复制，该过程的每次循环可以分为高温变性（DNA解链）、低温复性（引物结合到互补DNA链）、中温延伸（Taq酶从引物起始进行互补链的合成）三步．
6、对蛋白质进行纯化的方法通常是凝胶色谱法．

解答解：（1）题图中微生物的接种中使用了接种环，且是在固体培养基上接种，其接种方法是平板划线法，平板划线法是用接种环在固体培养基表面连续划线，从而将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面的接种方法；除此方法外，常用的微生物接种方法还有稀释涂布平板法．
（2）接种环通过灼烧灭菌，灼烧的接种环需冷却后才能接种的原因是防止高温杀死需接种的微生物．
（3）①配制培养基的操作步骤是：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板．
②培养基通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，在制备固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒置，目的是防止培养皿内壁上出现的冷凝水污染培养基．
③如果要分离土壤中能分解尿素的细菌，应选择上述以尿素为唯一氮源的A培养基，在该培养基中加入酚红指示剂，可初步鉴定出该种细菌能否分解尿素．
④B培养基的成分中，碳源为有机物，可判断所培养微生物的同化作用类型是异养型．
（4）利用PCR技术扩增DNA的过程中，每次循环复制可分变性、复性好和延伸三步；尿素分解菌能分解尿素的直接原因是尿素分解菌能合成脲酶，脲酶能催化尿素的分解，脲酶的化学本质是蛋白质，该物质被提取出后的纯化方法通常是凝胶色谱法．
故答案为：
（1）平板划线     稀释分散    稀释涂布平板法
（2）灭菌防止高温杀死需接种的微生物
（3）①bdcea    ②高压蒸汽灭菌防止培养皿内壁上出现的冷凝水污染培养基    ③A 酚红 ④异养型
（4）变性、复性和延伸    脲酶   凝胶色谱法

点评本题考查了微生物培养、PCR技术、蛋白质的纯化的相关知识，考生识记培养基为微生物提供的营养成分、培养微生物常用的接种方法、PCR技术的步骤，明确鉴定培养基鉴定微生物的原理和凝胶色谱法分离物质的原理是解题的关键．

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