Question

5．根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
（1）限制性内切酶主要来源于原核生物，切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有黏性末端和平末端．
（2）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即E•coliDNA连接酶和T₄DNA连接酶
（3）反转录作用的模板是mRNA，若要在体外获得大量反转录产物，常采用PCR技术，该技术所需要的条件有模板DNA、引物、Taq酶（热稳定DNA聚合酶）、原料和能量等．
（4）基因工程中除质粒外，λ噬菌体的衍生物和动植物病毒也可作为运载体．
（5）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，而是应该用Ca²⁺进行处理．

Answer 1

分析 基因工程至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体．限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，形成黏性末端和平末端两种．DNA连接酶分为两类：E．coliDNA连接酶和T₄DNA连接酶．基因工程常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒．

解答 解：（1）限制性内切酶主要来源于原核生物，限制性核酸内切酶可以将DNA分子切成两种类型的末端，平末端和黏性末端．
（2）DNA连接酶分为两类：E．coliDNA连接酶和T₄DNA连接酶．这二者都能连接黏性末端，此外T₄DNA连接酶还可以连接平末端，但连接平末端时的效率比较低
（3）反转录是以mRNA为模板逆转录先合成单链DNA，再合成双链DNA，利用PCR技术进行大量扩增．该技术所需要的条件有模板DNA、引物、Taq酶（热稳定DNA聚合酶）、原料和能量等．
（4）基因工程中除质粒外，动植物病毒和λ噬菌体的衍生物也可作为运载体．
（5）当受体细胞是细菌时，为了增大导入的成功率，常用Ca²⁺处理，得到感受态细胞，此时细胞壁和细胞膜的通透性增大，容易吸收重组质粒．未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱．
故答案为：
（1）原核   黏性末端和平末端  
 （2）E•coliDNA连接酶和T₄DNA连接酶
（3）mRNA     PCR    Taq酶（热稳定DNA聚合酶） 
（4）λ噬菌体的衍生物    
（5）Ca²⁺

点评 本题考查基因工程的相关知识，重点考查基因工程的工具，只要考生识记基因工程三种工具的相关知识即可，属于考纲识记层次的考查，这需要考生在平行的学习过程中构建相关知识网络结构．