Question

15．为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行如图A所示的实验．

（1）配制好的培养基灭菌通常可以使用高压蒸汽灭菌法．步骤③与步骤②中培养基成分的最大区别是石油是唯一碳源．
（2）同学甲进行过程④的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示．该同学的接种方法是稀释涂布平板法；推测同学甲用此方法接种时出现图B结果可能的操作失误是涂布不均匀；在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格．
（3）同学乙也按照同学甲的接种方法进行了过程④的操作：将1mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、58和57．据此可得出每升样品中的活菌数为5.7×10⁷．
（4）步骤⑤需要震荡培养其目的是提高培养液溶氧量，同时使菌体与培养液充分接触，提高营养物质利用率．
（5）步骤⑤后取样测定石油含量的目的是筛选出分解石油能力最好的细菌．

Answer 1

分析 1、微生物常见的接种的方法：
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
2、分析图B：图B采用的是稀释涂布平板法，但涂布不均匀．

解答 解：（1）培养基通常使用高压蒸汽灭菌法灭菌．该实验的目的是为了分离和纯化高效分解石油的细菌，因此步骤③与步骤②中培养基成分相比，最大的区别是石油是唯一碳源．
（2）图B采用的接种方法是稀释涂布平板法，出现图B结果可能的操作失误是涂布不均匀．
（3）同学乙也按照同学甲的接种方法进行了步骤④的操作：将1mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接人0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、58和57．据此可得出每升样品中的活菌数为（56+58+57）÷3÷0.1×1000×100=5.7×10⁷个．
（4）步骤⑤需要振荡培养，原因是提高培养液中（溶解）氧的含量，通过振荡可使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率．
（5）步骤⑤后取样测定石油含量的目的是筛选出分解石油能力最强的细菌．
故答案为：
（1）高压蒸汽灭菌      石油是唯一碳源
（2）稀释涂布平板法     涂布不均匀    检测培养基平板灭菌是否合格
（3）5.7×10⁷
（4）菌体与培养液充分接触
（5）筛选出分解石油能力最好的细菌

点评 本题结合图解，考查微生物分离和培养，要求考生识记接种微生物常用的两种方法；识记无菌技术；掌握稀释涂布平板法计数时的相关计算，能结合图中信息准确答题．