Question

【题目】科学家将绿色荧光蛋白(GFP)基因转入小鼠胚胎干细胞(ES)内，GFP基因若表达就会使细胞带有绿色荧光，继而利用带有绿色荧光的ES细胞培育出嵌合型的小鼠用于科学研究，流程如图所示。请回答：

(1)在步骤①中构建基因表达载体时，需要在GFP基因的首端加入____________酶识别和结合的部位，有了它才能驱动GFP基因转录出mRNA，最终获得GFP。GFP基因的尾端还需有_________，使转录在需要的地方停止下来。

(2)步骤②的受体细胞是小鼠ES细胞，ES细胞一般从囊胚的___________分离得到，且ES细胞在形态上表现为________________的特点。在培养ES细胞时，细胞充满培养皿底部后停止分裂，这种现象称为__________________。如果想继续培养则需要重新用__________处理，然后分瓶继续培养，这样的培养过程通常被称为____________________培养。

(3)图中重组囊胚在步骤⑤之前要先检测是否有绿色荧光细胞，再通过___________技术移入代孕母鼠子宫内继续发育。

Answer 1

【答案】RNA聚合 终止子 内细胞团 体积小、细胞核大、核仁明显 接触抑制 胰蛋白酶(或胶原蛋白酶) 传代 胚胎移植

【解析】

本题目考查基因工程原理以及胚胎移植相关内容，分析题图：图示为是转基因绿色荧光嵌合小鼠的培育过程，其中①表示基因表达载体的构建过程；②表示将目的基因导入受体细胞的过程；③表示受精作用；④表示早期胚胎发育过程；⑤表示胚胎移植过程；⑥表示妊娠产生转基因鼠的过程。

（1）启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点，能启动转录过程，因此，构建基因表达载体时，必须在目的基因首端加入启动子，在末端加入终止子，使转录在需要的地方停止下来；

（2）ES细胞来自早期胚胎（囊胚的内细胞团），ES细胞在形态上表现为体积小、细胞核大、核仁明显，对ES细胞进行的初次培养成为原代培养，在培养ES细胞时，细胞充满培养皿底部后停止分裂，这种现象称为接触抑制，已经接触抑制的细胞需要用胰蛋白酶(或胶原蛋白酶)，使细胞分散，便于传代培养；

（3）由图可知，目的基因和标记基因都是GFP基因，因此图中重组囊胚在步骤⑤之前要先检测是否有绿色荧光细胞，再通过胚胎移植技术移入代孕母鼠子宫内继续发育。