Question

14．生活饮用水已经过沉淀、过滤、加氯消毒等处理，含微生物很少，但当其水源水不洁或处理达不到要求时，仍然会含相当量的微生物甚至含有致病性微生物；供水管道破损及二次供水等环节也可能导致生活饮用水的污染．因此生活饮用水的微生物安全性日常检测是很重要的．我国生活饮用水水质标准（GB5749-85）中规定生活饮用水中细菌总数不得大于100个/mL，总大肠菌群不得大于3个/L．
（1）检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为稀释涂布平板法．如果在培养基中出现了单个菌落，产生每个菌落的最初细胞数目是1个．
（2）用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？需要
为什么？因为需要判断培养基是否被污染．
（3）纯化大肠杆菌时使用的培养基一般用高压蒸汽灭菌法灭菌，关键的步骤是接种，纯化培养方法除（1）中的外还有平板划线法．
（4）如果要测定水中的病毒种类，可以用PCR技术使其遗传物质扩增，PCR技术的原理是DNA双链复制，该过程使用的酶为Taq酶（耐高温的DNA聚合酶）．

Answer 1

分析 稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞．
计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内．经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数．此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数．

解答 解：（1）对微生物的分离常用稀释涂布平板法和平板划线法进行接种，但稀释涂布平板法适用于微生物的计数．如果在培养基中出现了单个菌落，产生每个菌落的最初细胞是一个．
（2）由于需要判断培养基是否被污染，所以用该方法统计样本菌落数时需要设置对照组．
（3）纯化大肠杆菌时使用的培养基一般用高压蒸汽灭菌法灭菌，不可用加入抗生素的方法防止杂菌感染．关键的步骤是 接种，纯化培养方法稀释涂布平板法外，还有 平板划线法．
（4）PCR技术的原理是运用了DNA复制的原理，该过程中需要使用耐高温的DNA聚合酶．
故答案为：
（1）稀释涂布平板法    1 
（2）需要   因为需要判断培养基是否被污染
（3）高压蒸汽灭菌       接种     平板划线法
（4）DNA双链复制     Taq酶（耐高温的DNA聚合酶）

点评 本题旨在考查微生物的分离和培养、某种微生物数量的测定和培养基对微生物的选择利用，意在考查具备验证简单生物学事实的能力，并能对实验现象和结果进行解释、分析和处理，具有对一些生物学问题进行初步探究的能力．