Question

1．如图是制备抗埃博拉病毒（EBOV）VP40蛋白单克隆抗体的过程．请据图回答：

（1）利用PCR获取目的基因的过程中，反应体系内要加入含有VP40基因的DNA、dNTP、Taq酶和根据目的基因的核苷酸序列合成的引物，且反应需要在一定的缓冲溶液中才能进行．
（2）选用EcoRI和XhoI双酶切的优点是防止酶切产物之间的随意连接，提高连接成功率；VP40基因进入大肠杆菌细胞，并在大肠杆菌内维持稳定和表达，该过程可称为转化．
（3）过程⑥常用的不同于植物原生质体融合的促融方法是用灭活的病毒处理．若把在HAT选择培养基上存活的细胞全部培养在同一培养基中，并从中提取出的抗体不是（是或不是）单克隆抗体．图示过程应用的生物技术是基因工程、动物细胞培养、动物细胞融合．

Answer 1

分析 1、图示过程中，①为获取目的基因，②为形成重组质粒，③为目的基因的导入，④为获取相应的蛋白质，⑤为注射入B淋巴细胞，⑥为形成杂交瘤细胞，⑦为获取单克隆抗体．
PCR技术的过程：高温变性、低温复性、中温延伸．条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）．
2、获得目的基因的方法：①从基因文库中获取  ②利用PCR技术扩增  ③人工合成（化学合成）．原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成．
3、DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体．
4、动物细胞融合原理是：细胞增殖、细胞膜的流动性．
细胞融合的方法有：物理法：离心、振动、电激；化学法：聚乙二醇；生物法：灭活的病毒（灭活的仙台病毒）．
最广泛的应用是：制备单克隆抗体．一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体．从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差．

解答 解：（1）PCR扩增时，需要在一定的缓冲溶液中加入DNA模板、分别与两条模板结合的引物、四种脱氧核苷酸和Taq 酶．故利用PCR获取目的基因的过程中，反应体系内要加入含有VP40基因的DNA、dNTP、Taq酶和根据目的基因的核苷酸序列合成的引物，且反应需要在一定的缓冲溶液中才能进行．
（2）EcoRI和XhoI切割形成的黏性末端不同，而DNA连接酶只能将具有相同黏性末端的DNA片段连接起来，因此为了防止目的基因反向粘连和质粒自行环化，酶切时可选用的酶是EcoRI和XhoI，提高连接成功率；VP40基因进入大肠杆菌细胞，并在大肠杆菌内维持稳定和表达，该过程可称为转化．
（3）诱导植原生质体能融合的方法：物理法：离心、振动、电激．化学法：聚乙二醇（PEG）．诱导动物细胞融合的方法有电激、聚乙二醇（PEG）、灭活的病毒等；过程⑥常用的不同于植物原生质体融合的促融方法是用灭活的病毒处理．若把在HAT选择培养基上存活的细胞全部培养在同一培养基中，并从中提取出的抗体不是单克隆抗体．图示过程应用的生物技术是基因工程、动物细胞培养、动物细胞融合．

故答案为：
（1）目的基因的核苷酸序列 缓冲
（2）防止酶切产物之间的随意连接，提高连接成功率  转化 
（3）灭活的病毒  不是  基因工程、动物细胞培养、动物细胞融

点评 本题难度不大，综合性较强，考查了基因工程、单克隆抗体的制备等知识，要求考生具有扎实的基础知识，并构建一定的知识网络．