Question

【题目】根据基因工程的有关知识，回答下列问题。

（1）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：

为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性核酸内切酶切割，该酶必须具有的特点是____________。

（2）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即_________和__________。

（3）若要在体外获得大量反转录产物，常采用____________技术。

（4）基因工程中除质粒外，____________和____________也可作为运载体。

（5）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是____________。

Answer 1

【答案】切割产生的DNA片段末端与EcoRI切割产生的相同 大肠杆菌DNA连接酶 T4DNA连接酶 PCR λ噬菌体衍生物 动植物病毒 未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱

【解析】

1、限制酶具有专一性，其能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并能切断特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键；一般情况下，切割目的基因和质粒要用同一种限制酶，若两种限制酶切割形成的黏性末端相同，也可以使用。

2、DNA连接酶能连接具有相同黏性末端的两个DNA片段，根据酶的来源不同，可以将其分为两类：一类是从大肠杆菌中分离得到的，称为E·coli DNA连接酶；另一类是从T4噬菌体中分离出来的，称为T4DNA连接酶。

（1）为使运载体与目的基因相连，不同的限制酶应切割出相同的黏性末端，故使用的酶应切割产生的DNA片段末端与EcoRI切割产生的相同。

（2）根据酶的来源不同，可以将DNA连接酶分为两类：E·coli DNA连接酶和T4DNA连接酶。

（3）反转录是以RNA为模版来合成DNA的过程。可以在体外短时间内大量扩增DNA的技术叫PCR技术（多聚酶链式反应）。

（4）基因工程中常用的运载体有质粒、动植物病毒和λ噬菌体的衍生物。

（5）大肠杆菌细胞外有细胞壁和细胞膜，能阻止其他物质的进入，吸收质粒（外源DNA）的能力极弱，只能通过Ca2+处理细胞，使细胞处于能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，这种细胞称为感受态细胞。