Question

Taq DNA聚合酶是从一种嗜热细菌中分离提取的，该菌是1966年从美国黄石国家森林公园的一个热泉中发现的。实验表明，PCR反应时变性温度为95 ℃，50个循环后，Taq DNA聚合酶仍有65%的活性。Taq DNA聚合酶的热稳定性是该酶用于PCR的前提条件，也是PCR技术能迅速发展和广泛应用的原因。Taq DNA聚合酶还具有逆转灵活性，其作用类似于逆转录酶。Taq DNA聚合酶表现为Mg²⁺依赖，该酶的催化活性对Mg ²⁺浓度非常敏感。测定结果为MgCl₂浓度在2.0 mmol/L时该酶催化活性最高，此浓度能最大限度地激活Taq DNA聚合酶的活性，Mg²⁺过高就抑制酶活性，因而MgCl₂的浓度在不同的反应体系中应适当调整，优化浓度。Taq DNA聚合酶具有5′→3′聚合酶活性和5′→3′外切酶活性，而无3′→5′外切酶活性，它不具有校对活性。因而在PCR中如发生某些碱基的错配，该酶是没有校正功能的。Taq DNA聚合酶的碱基错配几率为2.1×10^-4。

(1)Taq DNA聚合酶在高温下仍保持活性，因此在PCR扩增时可以________加入，________（填“需要”或“不需要”）再添加。

(2)影响PCR反应的影响因素除引物、反应温度、时间和TaqDNA聚合酶浓度外，从材料中可知，还应有________。

(3)这种嗜热细菌能够在热泉中生存，这是________的结果。

(4)PCR中由碱基错配引起的变异属于________。假设对一个DNA进行扩增，第一次循环时某一条模板链上发生碱基错配，则扩增若干次后检测所有DNA的扩增片段，与原DNA相应片段相同的占________。

 

Answer 1

（1）一次性　不需要　（2）Mg²⁺浓度　（3）长期自然选择　（4）基因突变　1/2