Question

4．为了解基因结构，通常选取一特定长度的线性DNA分子，先用一种限制酶切割，通过电泳技术将单酶水解片段分离，计算相对大小；然后再用另一种酶对单酶水解片段进行降解，分析片断大小．下表是某小组进行的相关实验．

已知一线性DNA序列共有5000bp（bp为碱基对）	第一步水解	产物（单位bp）	第二步水解	产物（单位bp）
	A酶切割	2100	将第一步水解产物分离后，分别用B酶切割	1900   200
		1400		800    600
		1000		1000
		500		500
	B酶切割	2500	将第一步水解产物分离后，分别用A酶切割	1900   600
		1300		800    500
		1200		1000   200
	经A酶和B酶同时切割	1900    1000    800    600    500    200

（1）该实验中体现出限制酶的作用特点是能够特异性识别DNA分子的特定核苷酸序列，并且在特定部位切割．
（2）由实验可知，在这段已知序列上，A酶与B酶的识别序列分别为3个和2个．
（3）根据表中数据，请在图中标出相应限制性酶的酶切位点并注明相关片断的大小．
．
（4）已知BamHⅠ与BglⅡ的识别序列及切割位点如右图所示，用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BamHⅠ和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，若干循环后  和序列明显增多．该过程中DNA连接酶催化磷酸二酯键的形成．
（5）一个基因表达载体的组成除了目的基因外，还必须有启动子、终止子以及标记基因．

Answer 1

分析 限制性核酸内切酶是可以识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶，简称限制酶．由表格分析可知A酶切割后有4段产物，说明酶A有3个切割位点；B酶切割后有3段产物，说明酶B有2个切割位点．限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA两条链分别切开时，产生的是黏性末端；限制酶在它识别序列的中心轴线将DNA切开时，产生的是平末端．

解答 解：（1）限制酶的作用特点是能够特异性识别DNA分子的特定核苷酸序列，并且在特定部位切割．
（2）单独用A酶切割后形成4个片段，说明有3个A酶识别位点；单独用B酶切割后形成3个片段，说明有2个B酶切割位点．
（3）由表中酶切割后片段长度可知，1900+600=2500，800+500=1300，1000+200=1200，所以连接如图所示．

（4）巳知BamHI与BglII的识别序列及切割位点如图2所示．用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BamHⅠ和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，若干循环后和序列明显增多．DNA连接酶催化形成的是磷酸二酯键．
（5）一个基因表达载体的组成除了目的基因外，还必须有启动子、终止子以及标记基因．
故答案为：
（1）能够特异性识别DNA分子的特定核苷酸序列，并且在特定部位切割
（2）3     2
（3）
（4） 磷酸二酯键
（5）启动子 终止子

点评 本题结合图表，考查基因工程的原理及技术，要求考生识记基因工程的原理、工具及操作步骤，重点考查要求理解和掌握限制酶和DNA连接酶的作用部位和作用对象，能结合表中信息准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．