Question

18．淀粉酶是用途最广、产量最大的酶制剂之一，广泛用于印染、酿造和医药行业．请回答：
（1）配制筛选能分泌淀粉酶的微生物的培养基时，应以淀粉为唯一碳源．获得的菌种长期保存的方法是甘油管藏．
（2）从面粉加工厂附近的土壤中，取5g土壤倒入装有45mL蒸馏水并带有玻璃珠的锥形瓶中振荡，制成土壤悬液．将土壤悬液稀释10⁴倍后，用稀释涂布平板法分别将0.1mL的菌液接种到3个平板上，培养一段时间，3个平板中的菌落数分别为53个、60个、73个，则土壤悬液中分泌淀粉酶的微生物有6.2×10⁶个/mL．将接种后的平板置于恒温培养箱中倒置（填“正置”或“倒置”）培养．
（3）在培养基中加入碘化钾后，出现透明圈的菌落能分泌淀粉酶，原理是淀粉遇碘化钾变蓝，淀粉酶分解淀粉后出现透明圈．一般情况下，透明圈直径（D）和菌落直径（d）的比值（$\frac{D}{d}$）反映了淀粉酶的活性，它们的关系是D/d值越大，淀粉酶活性越高．
（4）筛选获得的微生物，经鉴定是芽孢杆菌，芽孢杆菌除产生活性较强的淀粉酶外，还产生活性较强的蛋白酶和脂肪酶，因此，在动物饲料中添加芽孢杆菌或其代谢产物可提高动物对营养物质消化吸收的效率．

Answer 1

分析 1、菌种保存

	临时保存法	甘油管藏法
适用对象	频繁使用的菌种	长期保存的菌种
培养及类型	固体斜面培养基	液体培养基
温度	4℃	-20℃
方法	菌落长成后于冰箱中保存，每3～6个月将菌种从旧的培养基转移到新鲜培养基上	将培养的菌液与等体积灭菌后的甘油混合均匀后于冷冻箱内保存

2、平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染．

解答 解：（1）根据选择培养基的配置原则，配制筛选能分泌淀粉酶的微生物的培养基时，应以淀粉为唯一碳源．获得的菌种长期保存的方法是甘油管藏．
（2）对微生物计数一般采用稀释涂布平板法．根据题干中所给数据，土壤悬液中分泌淀粉酶的微生物有=（53+60+73）÷3÷0.1×10⁴=6.2×10⁶个/mL．为了防止培养基中的冷凝水污染培养基，需要将接种后的平板置于恒温培养箱中倒置培养．
（3）淀粉遇碘化钾变蓝，淀粉酶分解淀粉后出现透明圈，因此在培养基中加入碘化钾后，出现透明圈的菌落能分泌淀粉酶．一般情况下，透明圈直径（D）和菌落直径（d）的比值（$\frac{D}{d}$）反映了淀粉酶的活性，D/d值越大，淀粉酶活性越高．
（4）分析题意可知，芽孢杆菌除产生活性较强的淀粉酶外，还产生活性较强的蛋白酶和脂肪酶，因此，在动物饲料中添加芽孢杆菌或其代谢产物可提高动物对营养物质消化吸收的效率．
故答案为：
（1）淀粉       甘油管藏
（2）稀释涂布平板      6.2×10⁶   倒置
（3）淀粉遇碘化钾变蓝，淀粉酶分解淀粉后出现透明圈    D/d值越大，淀粉酶活性越高
（4）对营养物质消化吸收

点评 本题考查了微生物的分离和培养的有关知识，要求考生能够掌握培养基配制的原则，掌握菌种保存的方法，掌握微生物分离和纯化的方法，再结合所学知识准确答题．