Question

血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分，负责血液中O₂和部分CO₂的运输。请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题。

(1)将实验流程补充完整：A为________，B为________。凝胶色谱法的基本原理是根据________而达到蛋白质分离的有效方法。

(2)洗涤红细胞的目的是去除________，洗涤次数过少，无法除去；离心速度过高和时间过长会使____________一同沉淀。达不到分离的效果。洗涤干净的标志是________________。释放血红蛋白的过程中起作用的试剂是________________。

(3)在B过程中加入物质的量浓度为20m mol/L的磷酸缓冲液(pH为7.0)的目的是__________________________________________________________________。如果红色区带________________，说明色谱柱制作成功

 

Answer 1

【答案】

（1）血红蛋白的释放 样品的加入和洗脱 相对分子质量的大小

（2）杂蛋白（血浆蛋白） 白细胞（等） 离心后上清液中没有黄色 蒸馏水和甲苯

（3）模拟生物体内的生理环境（保持体外pH和体内一致、保持蛋白质的正常结构、维持洗脱所需的压力等合理答案均可）均匀一致的移动

【解析】蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定。样品处理包括红细胞的洗涤、血红蛋白的释放和分离血红蛋白溶液；通过透析对血红蛋白溶液进行粗分离，透析的原理是透析袋能使小分子自由进出而大分子则保留在袋内，从而除去分子量较小的杂质；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量魇杂质蛋白除去，从而对样品进一步纯合，最后SDS—聚丙烯酰凝胶电泳进行纯度鉴定。在B过程中加入物质的量浓度为20m mol/L的磷酸缓冲液(pH为7.0)的目的是模拟生物体内的生理环境（保持体外pH和体内一致、保持蛋白质的正常结构、维持洗脱所需的压力等合理答案均可）；如果红色区带均匀一致的移动

，说明色谱柱制作成功。