Question

 某质粒上有Sal I、HindIII、BamH I三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题．

  (1)将含有目的基因的DNA与质粒分别用Sal I酶切，酶切产物用             催化连接后，两个DNA片段的连接结果有              种。

  (2)在构建重组质粒时，应选用            两种酶对            进行切割，

    以保证重组DNA序列的唯一性。

  (3)为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，应在培养基中加入                     ，理由是                                                                  。

  (4)将转人抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用                    技术，愈

    伤组织经                   进而形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培

养基中添加               。

Answer 1

（1）DNA连接酶      3   （2）Sal I、HindIII  分质粒和含抗盐基因的DNA

   （3）氨苄青霉素    重组质粒中含抗氨苄青霉基因而抗四环素基因被破坏

   （4）植物组织培养     细胞培殖和分化

植物激素（生长调节剂、生长素和细胞分裂素）

解析:

本题考查基因工程操作步骤，属于考纲理解应用层次。⑴将DNA片段连接起来用的是DNA连接酶，两个DNA片段的连接存在质粒与质粒连接、质粒与目的基因连接、目的基因与目的基因连接3种连接方式。⑵根据目的基因与质粒上含有的限制酶切割位点的特点可知，为了避免出现3种组合，可以选用Sal I、HindIII限制酶分别切割质粒和目的基因。⑶这样得到的重组质粒中标记基因只剩下了抗氨苄青霉素基因，这样在培养中添加氨苄青霉素就可以筛选出含有重组质粒的农杆菌。⑷要将单个的细胞培育成完整的植株需要利用植物组织培养技术，愈伤组织通过细胞分化和细胞增殖发育成完整植株。