Question

在实验室培养微生物，一方面需要为培养的微生物提供合适的营养和环境条件，另一方面需要确保无处不在的其他微生物无法混入．请回答下列相关问题：
（1）培养基能为培养的微生物提供营养．各种培养基的具体配方不同，但一般都含有

 

、

 

、

 

、

 

；另外，培养基还需要满足微生物生长对

 

、

 

、

 

的要求．
（2）获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵．对实验操作的空间、操作者的衣着和手，需进行清洁和

 

（填“消毒”或“灭菌”）；对用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等需进行

 

（填“消毒”或“灭菌”）．
（3）微生物接种的方法很多，其核心都是要防止杂菌的污染，保证培养物的纯度．微生物接种最常用的方法是

 

和

 

．
（4）对分离的微生物作进一步的鉴定，常需要借助生物化学的方法．如在以

 

为唯一氮源的培养基中加入

 

，可用来鉴定分解尿素的细菌；在以

 

为唯一碳源的培养基中加入

 

，可用来鉴定纤维素分解菌．

Answer 1

考点：微生物的分离和培养

专题：

分析：1．培养基的概念、种类及营养构成
（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质．

（3）营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．
2．无菌技术
（1）关键：防止外来杂菌的入侵．
（2）具体操作
①对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒．
②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌．
③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行．
④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触．
（3）消毒和灭菌

	消毒	灭菌
概念	使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法	灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
适用对象	操作空间、某些液体、双手等	接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等

3、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板．
4、接种方法：平板划线法和稀释涂布法．
（1）平板划线操作：
①挑取他含菌样品：选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量菌种．
②划A区：将平板倒置于煤气（酒精）灯旁，左手拿出皿底并尽量使平板垂直于桌面，有培养基一面向着煤气灯（这时皿盖朝上，仍留在煤气灯旁），右手拿接种环先在A区划3-4条连续的平行线（线条多少应依挑菌量的多少面定）．划完A区后应立即烧掉环上的残菌，以免因菌过多而影响后面各区的分离效果．在烧接种环时，左手持皿底并将其覆盖在皿盖上方（不要放入皿盖内），以防止杂菌的污染．
③划其他区：将烧去残菌后的接种环在平板培养基边缘冷却一下，并使B区转到上方，接种环通过A区（菌源区）将菌带到B区，随即划数条致密的平行线．再从B区作C区的划线．最后经C区作D区的划线，D区的线条应与A区平行，但划D区时切勿重新接触A、B区，以免极该两区中浓密的菌液带到D区，影响单菌落的形成．随即将皿底放入皿盖中．烧去接种环上的残菌．
④等平板凝固后，将平板倒置．
（2）稀释涂布法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养．在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落．能够测定样品中活菌数的方法是：稀释涂布平板法．

解答： 解：（1）各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．
（2）获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵．对实验操作的空间、操作者的衣着和手，需进行清洁和消毒，对用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等需进行灭菌．
（3）常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布法．
（4）微生物的鉴定常用鉴别培养基，在尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，观察是否变红，可用来鉴定分解尿素的细菌；在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入刚果红，观察是否有透明圈产生，可用来鉴定纤维素分解菌．
故答案为：（1）水、碳源、氮源、无机盐   pH、特殊营养物质、氧气   
（2）消毒  灭菌
（3）平板划线法  稀释涂布法
（4）尿素  酚红指示剂   纤维素  刚果红

点评：本题主要考查微生物实验室培养的相关知识，意在考查考生对相关知识的理解，把握知识间的内在联系的能力．