Question

【题目】日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白（GFP）等方面的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图。据图回答：

（1）绿色荧光蛋白基因在该实验中是作为______基因。图中过程②需要用到的工具酶有________________。

（2）限制性核酸内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，请写出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端：____________。

（3）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是____________。检测猪胎儿的DNA上是否插入了GFP基因的方法是___________________。

（4）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为基因表达载体上的标记基因，其作用是_________________________________。

（5）若要在体外扩增绿色荧光蛋白基因可采用PCR技术。标准的PCR过程分为三个步骤：第一步是“高温变性”；第二步是“低温复性”；第三步是“中温延伸”，需要用到_______________酶，需要的原料是_______________。

（6）在培养重组细胞时，培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和________等。

Answer 1

【答案】目的 限制性核酸内切酶（或限制酶）和DNA连接酶 （或—CTAG） 显微注射技术 DNA分子杂交技术 为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因 （热稳定）DNA聚合（或Taq） 脱氧核苷酸 动物血清

【解析】

分析图示：过程①表示目的基因（绿色荧光蛋白基因）的获取，过程②表示基因表达载体的构建，过程③表示将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞；之后的过程是：借助核移植技术将含有绿色荧光蛋白基因的猪胎儿成纤维细胞的细胞核与去核的卵母细胞重组，获得重组细胞；借助早期胚胎培养技术将重组细胞培养成早期胚胎，进而进行胚胎移植，最终获得绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪。

(1) 图示为绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程，其中的绿色荧光蛋白基因在该实验中是作为目的基因。 过程②为基因表达载体的构建，需要用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶。

(2) 限制性核酸内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端是 （或—CTAG）。

(3) 过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞（将目的基因导入动物细胞）时，采用最多也最有效的方法是显微注射技术。检测猪胎儿（转基因生物）的DNA上是否插入了GFP基因（目的基因），可采用DNA分子杂交技术。

(4) 标记基因的作用是：鉴定受体细胞中是否含有目的基因。

(5) 采用PCR技术扩增目的基因时，需要以脱氧核苷酸为原料、在热稳定DNA聚合酶（或Taq酶）的催化下进行延伸。

(6) 动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素和动物血清等。