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    6．草鱼病毒性出血病是由草鱼呼吸孤病毒（GCRV）引起的，目前尚未找到防治药物．如图是通过基因工程方法将PV7双基因与某质粒连接，并通过草鱼攻毒实验检测免疫保护效果的过程示意图．图中P10和PH为启动子，箭头表示转录方向．PV71和PV72为GCRV外壳蛋白基因（DNA片段）．请回答下列问题：

    草鱼病毒性出血病核酸疫苗实验鱼的死亡率和免疫保护率记录表
    组别疫苗注射量实验鱼数死亡鱼数死亡率免疫保护率
    110μg20尾0尾0100%
    230μg20尾0尾0100%
    360μg20尾1尾5%95%
    空载体30μg20尾6尾30%70%
    对照020尾20尾100%0
    （1）制备草鱼病毒性出血病核酸疫苗，获取大量PV7双基因时可采用PCR技术进行扩增，该技术除需要原料、模板、引物外，还必须用热稳定DNA聚合（或Taq）酶．PCR一般要经历三十次以上的循环，每次循环包括变性、复性和延伸三个阶段，其中变性是指高温（或90-95℃、受热）条件下，DNA分子解旋（为单链）的过程．
    （2）使用不同的限制酶切割PV71和PV72基因，是为了防止连接的位置错误，用不同限制酶先后两次切割质粒，是为了防止质粒自身环化，有利于提高核酸疫苗构建的成功率．
    （3）攻毒实验检测是指将不同浓度的核酸疫苗导入草鱼体内，通过转录和翻译产生草鱼呼肠孤病毒外壳蛋白，使草鱼生成抗体和记忆细胞，同时给草鱼注入相同浓度的GCRV，我，统计草鱼免疫保护率，实验结果说明核酸疫苗起到了保护草鱼、预防草鱼病毒性出血病的作用．导入空载体（普通质粒）的草鱼免疫保护率达到70%，但草鱼体内并未检测到抗体水平的明显增加，可能的原因是导入草鱼体内的空载体（普通质粒）能提高草鱼的非特异性免疫能力．核酸疫苗注射后，科学家发现PV7双基因在启动子的驱动下持续表达，至第49天核酸疫苗仍没有被降解，仍能检测到PV7双基因的转录．综上所述，与常规基因工程生产的蛋白质疫苗相比，核酸疫苗所具备的优点有抗原性强、保护时间长、安全性好、制备和运输方便．

    分析 析题图：图中P10和PH为启动子，箭头表示转录方向．PV71和PV72为GCRV外壳蛋白基因（DNA片段）．
    分析表格：组别5是对照组，与对照组相比，注射疫苗量在10ug～60ug时，草鱼病毒性出血病核酸疫苗实验鱼的死亡率都几乎为0，即免疫保护率几乎均为100%．组别4注射导入普通质粒的草鱼免疫保护率达到了70%．

    解答 解：（1）PCR技术是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，PCR扩增目的基因时，除需要原料、模板、引物外，还需热稳定DNA聚合酶，每次循环需经过模板在高温（或90-95℃、受热）条件下变性，解旋为单链、复性（引物与DNA单链结合），热稳定DNA聚合酶在适当温度下催化DNA链延伸合成三步．
    （2）启动子P10能启动PV71基因的转录，PH能启动PV72基因的转录，用不同的限制酶切割质粒PV71、PV72基因是为了防止连接位置错误，用不同的限制酶先后两次切割质粒，是为了防止质粒向身环化，还有利于提高核酸疫苗构建的成功率．
    （3）实验结果说明核酸疫苗起到了保护草鱼、预防草负病毒件出血病的作用，导入空载体（普通质粒），草鱼体内并未检测到抗体水平的明显增加，可能的原因是空载体（普通质粒）能提高草鱼的非特异性免疫能力，所以免疫保护率提高．与常规基因工程生产的蛋白质疫苗相比，核酸疫苗具有抗原性强、保护吋问长、安全性好、制备和运输方便等优点．
    故答案为：
    （1）引物          热稳定DNA聚合（或Taq）  高温（或90-95℃、受热）   解旋（为单链）
    （2）连接的位置错误       质粒自身环化
    （3）核酸疫苗起到了保护草鱼、预防草鱼病毒性出血病的作用   导入草鱼体内的空载体（普通质粒）能提高草鱼的非特异性免疫能力   抗原性强、保护时间长、安全性好、制备和运输方便

    点评 本题结合图标，考查基因工程和免疫的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节；识记免疫调节的具体过程，能结合图中信息准确答题，属于考纲理解和应用层次的考查．

    练习册系列答案
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