Question

3．内蒙古白绒山羊的血管内皮生长因子基因（VEGF164），若在皮肤毛囊细胞中特异性表达，可促进毛囊发育和毛发生长，显著提高羊毛产量．科学家将该基因导入羊胎儿的成纤维细胞核，成功培育出转基因克隆山羊．技术流程如下图，其中EcoRⅠ、SalⅠ、SphⅠ为限制酶．

请据图回答．
（1）在构建基因表达载体的过程中，应采用SalⅠ、SphⅠ（填限制酶名称）对质粒和含绿色荧光基因的DNA片段进行酶切，再经相应处理形成重组质粒．图中的质粒应具备的基本条件有能在宿主细胞内复制并稳定保存、具有1至多个限制酶的切割位点（答出两点）；
而绿色荧光基因的作用是作为标记基因，检测目的基因是否导入成纤维细胞（作为标记基因）．
（2）要使VEGF164在皮肤毛囊中表达，须将它与羊绒蛋白基因的启动子、终止子等调控组件重组起来，构建基因表达载体．
（3）图中①将基因表达载体导入胎儿成纤维细胞核的方法是显微注射法．将导入成功的细胞核注入到去核的卵母细胞构成重组细胞，培养成早期胚胎，经图中②胚胎移植技术可培育成转基因克隆山羊．

Answer 1

分析 分析题图：图示标志转基因克隆山羊的培育过程．①表示将目的基因导入受体细胞的过程，将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；②表示胚胎移植过程．在选择限制酶时，保证目的基因和标记基因不被破坏，同时应有相同黏性末端，本题中绿色荧光基因作为标记基因用于检测目的基因是否导和受体细胞，在选择限制酶时不能用EcoRⅠ，而选择SalⅠ、SphⅠ．

解答 解：（1）构建基因表过载体时，应保证有标记基因、目的基因，因此在选择限制酶时，保证目的基因和标记基因不被破坏，同时应有相同黏性末端，本题中绿色荧光基因作为标记基因用于检测目的基因是否导和受体细胞，在选择限制酶时不能用EcoRⅠ，而选择SalⅠ、SphⅠ．质粒应具备的基本条件有能在宿主细胞内复制并稳定保存、具有1至多个限制酶的切割位点、具有标记基因等；而绿色荧光基因的作用是作为标记基因，检测目的基因是否导入成纤维细胞．
（2）基因表达载体的组成部分包括目的基因、标记基因、启动子和终止子．
（3）动物基因工程中将目的基因导入受体细胞常用显微注射法，动物胚胎工程得到的早期胚胎通过胚胎移植技术可培育成转基因克隆山羊．
故答案为：
（1）SalⅠ、SphⅠ能在宿主细胞内复制并稳定保存、具有1至多个限制酶的切割位点    
作为标记基因，检测目的基因是否导入成纤维细胞（作为标记基因）
（2）启动子、终止子
（3）显微注射法       胚胎移植

点评 本题考查了基因工程、细胞工程和胚胎工程的有关知识，要求考生能够掌握基因工程的原理、方法、步骤，掌握限制酶的作用特点以及基因表达载体的组成，再结合所学知识准确答题．