Question

【题目】请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答下列问题：

（1）将实验流程按先后顺序补充完整：_______________、_______________。

（2）凝胶色谱法的基本原理是根据_______________________分离蛋白质。

（3）洗涤红细胞的目的是去除______________,洗涤干净的标志是_____________________。为防止血液凝固，在采血容器中通常要预先加入____________（抗凝剂）。

（4）下图是凝胶色谱法分离血红蛋白时样品加入过程的示意图,正确的加样顺序是________。

（5）在凝胶色谱操作过程中，一旦发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象，解决的办法是：___________________。

Answer 1

【答案】血红蛋白的释放 凝胶色谱柱的装填 相对分子质量的大小 去除杂蛋白 离心后的上清液不再呈现黄色 柠檬酸钠 ④①②③ 重新装填凝胶色谱柱

【解析】

凝胶色谱法（分配色谱法）：

（1）原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。

（2）步骤：血红蛋白的提取和分离流程为：红细胞的洗涤→血红蛋白的释放→分离血红蛋白溶液→透析→凝胶色谱柱的制作→凝胶色谱柱的装填→样品的加入和洗脱。

（1）根据分析，血红蛋白的提取步骤：红细胞的洗涤→血红蛋白的释放→分离血红蛋白溶液→透析→凝胶色谱柱的制作→凝胶色谱柱的装填→样品的加入和洗脱。

（2）凝胶色谱法的原理是根据相对分子质量的大小分离蛋白质。

（3）洗涤红细胞的目的是去除杂蛋白，以利于后续步骤的分离纯化；洗涤干净的标志是离心后的上清液不再呈现黄色；为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝血剂柠檬酸钠，其比例是每100mL血液加入3.0g柠檬酸钠。

（4）加样顺序是调整缓冲液面、滴加透析样品、样品渗入凝胶床、再调整缓冲液面，即④①②③。

（5）如果发生洗脱液流干的现象，需要重新装填凝胶色谱柱。