Question

8．利用微生物转化胆固醇在医药生产上有重要作用．实验人员从土壤中筛选胆固醇转化菌株的过程如图．请分析回答下列问题：

（1）实验人员将土壤样品接种到富集培养液①中培养时，需要将其置于摇床上不断振荡，其主要的作用有增加溶解氧
（2）培养一段时间后，从①中取适量培养液转移接种到选择培养液②中培养36h后，再转移到相同的选择培养液③中培养．与培养液①不同，培养液②③成份的主要特点是以胆固醇为唯一碳源．在相同的培养液②③中转移培养主要是为了避免原培养液中的干扰，同时，又可以筛选纯化获得可转化胆固醇的菌种
（3）从③中取适量的培养液涂布到④之前，需要，涂布前需将涂布器灼烧并冷却
（4）根据⑤中菌落的形态特征，选取所需的菌种接种到培养基⑥中临时斜面保藏．
（5）为进一步鉴定菌种，需从菌株中提取少量的DNA分子通过PCR（填技术）扩增并检测．

Answer 1

分析 从土壤中分离微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株．胆固醇属于脂质，其主要元素组成为C、H、O．从土壤中筛选胆固醇转化菌株需要使用以胆固醇为唯一碳源的选择培养基．

解答 解：（1）分解胆固醇的微生物属于需氧型微生物，所以将土壤样品接种到富集培养液①中培养时，需要将其置于摇床上不断振荡以增加溶解氧．
（2）据图分析，培养液②③的作用是选择培养，筛选胆固醇转化菌株需要使用以胆固醇为唯一碳源的选择培养基．在相同的培养液②③中转移培养主要是为了避免原培养液中碳源的干扰，又可以筛选纯化获得可转化胆固醇的菌种．
（3）选择培养后的培养液需要进行梯度稀释才能进行涂布培养，涂布前需将涂布器在酒精灯火焰旁进行灼烧灭菌并冷却．
（4）筛选出目的菌株后，将菌种接种到培养基⑥中临时斜面保藏．
（5）为进一步鉴定菌种，需从菌株中提取少量的DNA分子通过PCR扩增并检测．
故答案为：
（1）增加溶解氧
（2）以胆固醇为唯一碳源   碳源   筛选纯化获得可转化胆固醇的菌种
（3）梯度稀释   灼烧并冷却
（4）斜面
（5）PCR

点评 本题主要考查微生物的筛选与分离、培养与保藏及PCR技术，意在强化学生对相关知识的识记、理解与运用．