Question

5．下列对在凝胶柱上加入样品和洗脱的操作，不正确的是（　　）

• A． 加样前要使柱内凝胶面上的缓冲液下降到与凝胶面平齐
• B． 让吸管管口沿管壁环绕移动，贴壁加样至色谱柱顶端，不要破坏凝胶面
• C． 打开下端出口，待样品完全进入凝胶层后，直接连接缓冲液洗脱瓶开始洗脱
• D． 待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，每5 mL收集一管，连续收集流出液

Answer 1

分析 蛋白质的提取和分离：
1、原理：凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小来分离蛋白质的有效方法，相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程长，移动的速度慢，相对分子质量大的蛋白质不容易进入凝胶内部的通道，路程短，移动的速度快，因此相对分子质量不同的蛋白质得以分离．
2、血红蛋白的提取与分离的实验步骤主要有：（1）样品处理：①红细胞的洗涤，②血红蛋白的释放，③分离血红蛋白溶液．（2）粗分离：①分离血红蛋白溶液，②透析．（3）纯化：调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质．（4）纯度鉴定--SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳．

解答 解：A、加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面平齐时，关闭出口，A正确；
B、加样时，用吸管小心的将1ml透析后的样品沿管壁环绕移动，贴壁加样至色谱柱顶端，不要破坏凝胶面，B正确；
C、加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内，等样品完全进入凝胶床后，调节缓冲液面，然后连接缓冲液洗脱瓶开始洗脱，C错误；
D、待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，每5 mL收集一管，连续收集流出液，D正确．
故选：C．

点评 本题考查蛋白质的提取和分离，对于此类试题，需要考生注意的细节较多，如实验的原理、实验步骤、实验采用的试剂及试剂的作用等，需要考生在平时的学习过程中注意积累．