肺细胞中的let-7基因表达减弱.癌基因RAS表达增强.会引发肺癌．研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达后.发现肺癌细胞的增殖受到抑制．该基因工程技术基本流程如图．(1)基因工程的步骤中.进行过程①为 (2)进行过程②时.需用酶处理贴附在培养皿壁上的细胞.以利于细胞培养．(3)研� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌．研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达后，发现肺癌细胞的增殖受到抑制．该基因工程技术基本流程如图．

（1）基因工程的步骤中，进行过程①为

（2）进行过程②时，需用

酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于细胞培养．
（3）研究发现，let-7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2．据图分析，可从细胞中提取

进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录．肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中

（RASmRNA/RAS蛋白质）含量减少引起的．
（4）某线性DNA分子分别用限制酶HindⅢ和SmaⅠ处理，然后用这两种酶同时处理，得到如下片段（kb为千个碱基对）：
HindⅢ：2.5kb，5.0kb；
SmaⅠ：2.0kb，5.5kb；
HindⅢ和SmaⅠ：2.5kb，3.0kb，2.0kb；
限制酶HindⅢ和SmaⅠ在此DNA分子中各有1个识别序列．两酶同时处理后得到的片段，再用限制酶EcoRⅠ处理，结果导致凝胶上3.0kb的片段消失，产生了1.5kb的新片段．请在给出的DNA分子上标注限制酶HindⅢ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位点：

（5）在生物工程中，为了获得足够数量的受精卵，先利用

刺激供体雌性鼠超数排卵．
（6）胚胎干细胞形态上具有

的特性．

考点：基因工程的原理及技术

专题：

分析：1、分析题图：图1表示利用基因工程技术将let一7基因导入肺癌细胞的流程，其中①表示基因表达载体的构建过程；②表示用胰蛋白酶处理组织细胞，使之成为单个细胞，再加细胞悬液进行细胞培养的过程．
2、图2表示let-7基因影响癌基因RAS的表达的原理，let-7基因转录产物miRNA与RAS基因转录产物RAS mRNA结合，使RAS基因翻译受到抑制，引起细胞中的RAS蛋白含量减少，进而导致癌细胞增殖受到抑制．

解答： 解：（1）基因工程的步骤中，进行过程①将let-7和载体形成重组DNA，即基因表达载体的构建．
（2）过程②表示动物细胞培养，培养过程中出现接触抑制后可以用胰蛋白酶处理，使之分散成单个的细胞，之后分装到其他培养瓶里面进行传代培养．
（3）判断目的基因是否在受体细胞中转录，可用分子杂交技术来进行，从细胞中提取mRNA和用放射性同位素或者荧光标记的目的基因单链DNA片段进行杂交．根据题中信息“肺组织细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达就增强，引发肺癌”导入let7基因后，肺癌细胞受到抑制，说明RAS基因表达减弱，导致细胞中的RAS蛋白质含量减少进而导致癌细胞受抑制．
（4）线性DNA分子在限制酶HindⅢ的切割下形成2.5kb和5.0kb的片段，因此限制酶HindⅢ在该DNA分子上具有一个酶切位点；同理可得，限制酶SmaⅠ在该DNA分子上也具有一个酶切位点．两种酶同时切割时，根据所得片段可以判断，限制酶HindⅢ的酶切位点在DNA分子左侧的2.5kb处，限制酶SmaⅠ的酶切位点在DNA分子右侧的2.0kb处，中间刚好有个3.0kb的片段．再用限制酶EcoRⅠ处理，结果导致凝胶上3.0kb的片段消失，产生一个1.5kb的新片段，说明限制酶EcoRⅠ的酶切位点就在3.0kb片段的中间位置．具体位置如下：

（5）在生物工程中，利用促性腺激素刺激供体雌性鼠超数排卵，获得足够数量的受精卵．
（6）胚胎干细胞形态上具有体积较小，细胞核大，核仁明显的特性．
故答案为：
（1）基因表达载体的构建　　
（2）胰蛋白酶
（3）RNA　RAS蛋白
（4）

（5）促性腺激素
（6）体积较小，细胞核大，核仁明显

点评：查基因工程的原理和技术、遗传信息的转录和翻译的相关知识，要求考生识记基因工程的工具和操作步骤，能分析图1，准确判断各过程的名称；识记动物细胞培养的过程和条件，掌握遗传信息的转录和表达过程，能利用图2信息答题．

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