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    【题目】我国公布的禁止进境检疫的有害生物烟草环斑病毒(TRSV)是RNA病毒。检疫部门取烟草叶片进行该病毒的诊断和检测，将待测样品利用RTPCR技术(逆转录PCR，具有灵敏度高、特异性强的优势)扩增样品。下图1是RTPCR技术的过程示意图，图2是PCR扩增产物的电泳图。请回答下列问题：

    (1) 图1过程①表示利用RNA获得cDNA，该过程需要________酶的参与，过程②需要加入________酶。

    (2) 待测样品中RNA的提供者可能是________和________，也可能只是________。

    (3) 图1过程①需要加入引物P2，该引物是依据________________的序列设计并生产的。过程②引物P2、P1都需加入，理由是__________________________。

    (4) 已知图2中电泳带1是取自未感染的烟叶样品电泳结果，电泳带2是不同大小DNA的标准参照，据图分析可以得出的结论是________，理由是______________________________。

    【答案】反转录 热稳定DNA聚合(Taq) 烟草(叶片) TRSV 烟草 TRSV蛋白外壳基因 DNA两条链的合成需要不同的引物 电泳带3对应的样品感染了TRSV 电泳带3和电泳带1相比出现了分子量大约是600 bp的DNA电泳带

    【解析】

    本题以图文结合为情境，考查学生对基因工程的基本操作程序等相关知识的识记和理解能力，以及获取信息、分析问题的能力。

    (1)图1中，过程①表示利用RNA获得cDNA的逆转录过程，该过程需要反转录酶的参与；过程②表示利用PCR技术扩增TRSV外壳蛋白基因cDNA的过程，需要加入热稳定DNA聚合酶(或Taq酶)。

    (2)由题意“检疫部门取烟草叶片进行该病毒的诊断和检测”可推知：待测样品中RNA的提供者可能是烟草和TRSV，也可能只是烟草。

    (3)利用PCR技术扩增目的基因的前提是：要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据　这一序列合成引物。图1中，过程①的产物是TRSV外壳蛋白基因，因此加入的引物P2是依据TRSV蛋白外壳基因的序列设计并生产的。过程②在扩增TRSV蛋白外壳基因时，两条模板链的碱基序列不同，与这两条模板链结合的引物也不同，即DNA两条链的合成需要不同的引物，因此引物P2、P1都需加入。

    (4)在图2中，已知电泳带2是不同大小DNA的标准参照，电泳带1是取自未感染的烟叶样品电泳结果，说明电泳带1对应的DNA只来自烟叶。对比分析电泳带1、2、3可知：电泳带3和电泳带1相比出现了分子量大约是600 bp的DNA电泳带，据此得出的结论是：电泳带3对应的样品感染了TRSV。

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