Question

6．埃博拉病毒（EBOV）是一种能引起人类和灵长类动物发生埃博拉出血热（EBHF）的烈性病毒，其遗传物质为RNA，利用相应的生物学技术制备出抗EBOV的单克隆抗体，可快速检测EBOV．请回答下列问题．
（1）途径一：在制备抗EBOV的单克隆抗体的过程中，先给小鼠注射一种纯化的EBOV蛋白，一段时间后，从小鼠的脾脏中获取B细胞，将获得的细胞与小鼠的骨髓瘤细胞融合，再经过筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞．诱导细胞融合的化学方法一般是用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂来诱导融合．
（2）途径二：可将无限增殖的基因用显微注射技术导入能产生抗EBOV抗体的小鼠免疫细胞中，以便源源不断地产生抗EBOV的单克隆抗体，此项工程所需要的工具是限制性核酸内切酶、DNA连接酶和运载体．

Answer 1

分析 1、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
2、单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体．

解答 解：（1）制备单克隆抗体时，首先给小鼠注射抗原，然后从小鼠的脾脏中获取已经免疫的B细胞，与小鼠的骨髓瘤细胞融合，再经过筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞．诱导细胞融合的化学方法一般是用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂来诱导融合．
（2）基因工程中，将目的基因导入动物细胞常用显微注射法．此项工程所需要的工具是限制性核酸内切酶、DNA连接酶和运载体．
故答案为：
（1）B    骨髓瘤         聚乙二醇（PEG）
（2）显微注射       限制性核酸内切酶、DNA连接酶和运载体

点评 本题考查基因工程、单克隆抗体的制备等知识，要求考生识记基因的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节；识记单克隆抗体的制备过程，能结合所学的知识准确答题．