Question

【题目】[生物——选修3:现代生物科技专题]将北极深海鲽鱼科的抗冻基因（AFP）转入番茄，可获得耐低温的抗冻番茄，抗冻番茄经低温诱导后可溶性蛋白均比对照明显增加，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳可检测到C区和B区染色加深。如图为抗冻番茹的培育流程，请回答下列问题：

（1）①过程为基因工程操作程序中的第二个步骤____________，将AFP基因和切开的Ti质粒连接成重组质粒需要____________酶，通常将AFP基因插入Ti质粒的____________上，有利于目的基因在受体细胞中稳定维持和表达。

（2）②过程采用最多的方法是____________，除此之外，还有____________（答出两种），③过程应用的主要技术是____________。

（3）可通过聚丙烯酰肢凝胶电泳检测抗冻植株中的可溶性蛋白，若____________，则表明AFP基因已表达成蛋白质产品；也可采用____________进行个体生物学水平的检测。

Answer 1

【答案】 基因表达载体的构建 DNA连接 T—DNA 农杆菌转化法 基因枪法、花粉管通道法 植物组织培养 C区和B区染色加深 低温处理并观察番茄的抗冻情况

【解析】试题分析：据图分析，图中①过程表示构建基因表达载体的过程，是基因工程的核心步骤；②过程表示将目的基因导入受体细胞（番茄细胞）的过程，常用农杆菌转化法；③过程表示植物组织培养过程，将番茄细胞培养成抗冻番茄植株。

（1）根据以上分析已知，①过程表示基因表达载体的构建过程，该过程需要用限制酶切割AFP基因和Ti质粒，再用DNA连接酶将两者连接起来；一般要将目的基因插入Ti质粒的可转移DNA（T-DNA）上，有利于目的基因在受体细胞中稳定维持和表达。

（2）②过程表示将目的基因导入受体细胞（番茄细胞）的过程，常用农杆菌转化法，也可以用基因枪法、花粉管通道法。③过程表示利用植物组织培养技术将番茄细胞培养成抗冻番茄植株的过程。

（3）根据题干信息分析，抗冻番茄经低温诱导后可溶性蛋白均比对照明显增加，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳可检测到C区和B区染色加深，因此可通过聚丙烯酰肢凝胶电泳检测抗冻植株中的可溶性蛋白，若C区和B区染色加深，则表明AFP基因已表达成蛋白质产品；也可采用低温处理并观察番茄的抗冻情况进行个体生物学水平的检测。