Question

【题目】如图为构建某重组质粒的过程示意图，lacZ 基因可使细菌利用加入培养基的物质X﹣gal，从而使菌落显现出蓝色，若无该基因，菌落则成白色。图中甲-戊DNA片段只注明了黏性末端处的碱基种类，其它碱基的种类未作注明。

（1）若酶 M 特异性识别的DNA碱基序列是，则酶N特异性识别的DNA碱基序列是______________________。

（2）过程②是将所有片段混合在一起，用___________酶拼接可得到不同的重组DNA。

（3）如果只考虑2个片段的组合，那么甲、乙、丁三个片段中能够形成环状DNA的片段组合是_____。

A．甲和乙 B．甲和甲 C．甲和丁 D．乙和乙 E．乙和丁 F．丁和丁

（4）为了筛选含重组质粒的受体菌，应在培养基中额外加入______________培养一段时间，挑选出___________色的菌落进一步培养。原来质粒中，限制酶M和N的酶切位点应该位于___________。

A．M位于青霉素抗性基因中，N位于lacZ基因中

B．N位于青霉素抗性基因中，M位于lacZ基因中

C．M和N都位于青霉素抗性基因中

D．M和N都位于lacZ基因中

（5）以此题为例，简述如何正确判断酶切位点的位置：_______________________。

Answer 1

【答案】 DNA连接酶 ABCDEF 青霉素和X-gal 白 D 不破坏全部标记基因而且有利于选择

【解析】

图中①表示酶切，切割DNA的工具是限制性核酸内切酶，又称限制酶，限制酶是基因工程必需的工具酶，其特性是一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列。DNA连接酶可以连接被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键，使两个DNA分子片段连接成一个DNA。

（1）质粒经过酶M和酶N的切割形成甲、乙片段，根据甲、乙片段的黏性末端可知，两种限制酶的识别序列分布是、，酶M特异性识别的DNA碱基序列是，则酶N特异性识别的DNA碱基序列是，由以上分析可知，酶N特异性识别的DNA碱基序列是。

（2）过程②是将所有片段混合在一起，用DNA连接酶拼接可得到不同的重组DNA。

（3）甲、乙、丁都有两个黏性末端，且都相同，因此如果只考虑2个片段的组合，那么甲、乙、丁三个片段中任意两个连接都能够连接形成环状DNA，即可能性有ABCDEF。

（4）根据题干信息，“lacZ 基因可使细菌利用加入培养基的物质X﹣gal，从而使菌落显现出蓝色，若无该基因，菌落则成白色，这表明青霉素抗性基因没有被破坏”可知，为了筛选含重组质粒的受体菌，应在通用培养基中额外加入青霉素和X-gal，培养一段时间，挑选出白色的菌落进一步培养。lacZ基因已经被破坏，因此在原来质粒中，限制酶M和N的酶切位点都位于lacZ基因中，故D正确。

（5）根据题图可知，若要判断酶切位点，可选择含有多个标记基因的质粒进行酶切，保证酶切时不破坏全部标记基因，而且有利于选择，通过选择培养基进行菌落的选择和判断。