Question

[生物--选修模块1：生物技术实践]
随着人类基因组计划的进展和多种生物基因组测序工作的完成，人类跨入了后基因、组和蛋白质组时代．对蛋白质的研究与应用，首先要获得纯度较高的蛋白质．
Ⅰ血红蛋白提取的具体过程可分为：
（1）红细胞的洗涤．具体操作过程是

 

．
（2）

 

；
（3）分离血红蛋白溶液．血红蛋白混合液在离心管中离心后，从上往下数第

 

层是红色透析液体即为血红蛋白的水溶液；
（4）透析．
Ⅱ透析后的样品还需经过凝胶色谱法进一步纯化，其目的是

 

．装填凝胶色谱柱时，要注意色谱柱内不能有气泡在，这是因为

 

．
Ⅲ判断纯化的蛋白质是否达到要求，可用电泳法对样品进行

 

，电泳是指

 

．

Answer 1

考点：制备和应用固相化酶

专题：

分析：血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定．首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即样品的处理；再经过透析去除分子量较小的杂质，即样品的粗分离；然后通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化；最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定．

解答： 解：Ⅰ、（1）红细胞的洗涤目的是去除杂蛋白，过程是将采集的血样低速短时间离心，吸出上层透明黄色血浆，再用五倍体积的生理盐水低速短时间离心重复洗涤三次．
（2）血红蛋白的释放：在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白．
（3）分离血红蛋白溶液：试管中的溶液分为4层．第一层为无色透明的甲苯层，第2层为白色薄层固体，是脂溶性物质的沉淀层，第3层是红色透明液体，这是血红蛋白的水溶液，第4层是其他杂质的暗红色沉淀物．血红蛋白混合液在离心管中离心后，从上往下数第3层是红色透析液体即为血红蛋白的水溶液；
（4）透析：可以去除样品中分子量较小的杂质，或用于更换样品的缓冲液．
Ⅱ、透析后的样品还需经过凝胶色谱法进一步纯化，其目的是去除相对分子量较大的杂质蛋白．装填凝胶色谱柱时，要注意色谱柱内不能有气泡在，这是因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果．
Ⅲ、判断纯化的蛋白质是否达到要求，可用电泳法对样品进行纯度鉴定，电泳是指带电离子在电场的作用下发生迁移的过程．
故答案为：Ⅰ将采集的血样低速短时间离心，吸出上层透明黄色血浆，再用五倍体积的生理盐水低速短时间离心重复洗涤三次   血红蛋白的释放  3
Ⅱ去除相对分子量较大的杂质蛋白    气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果
Ⅲ纯度鉴定   带电离子在电场的作用下发生迁移的过程

点评：本题考查血红蛋白提取和分离的相关知识，考查基本，来自课本，是基础知识考试的理想题目，学生应理解加记忆．