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    5．土壤中含有大量的难溶性磷酸盐，为了从土壤中筛选出能够将难溶性磷酸盐转化为能被植物吸收的可溶性磷的优良解磷菌株，科研人员进行了如下实验：
    实验原理：固体培养基中难溶性磷酸盐在微生物的作用下溶解，会在菌落周围形成透明圈（如图2），透明圈直径（D）与菌落直径（d）的比值（D/d）代表微生物溶解磷的能力大小．

    实验步骤：
    步骤1：取某地区土样10g制得土壤溶液并进行一定浓度梯度的稀释，取稀释液1mL接种到基础培养基A上，在适宜温度下培养72h．
    步骤2：在基础培养基A上用接种环挑取代表性菌落再次接种，培养3～4d后观察菌落的特征和透明圈的大小，初步筛选出三种优良解磷菌株（如表）．
    菌株透明圈直径（D）菌落直径（d）D/d
    M-3-0118.812.31.5
    B3-5-620.78.02.6
    T1-4-019.16.51.4
    （1）步骤1采用的是稀释涂布平板法分离解磷菌株；在统计菌落数目时，需按照菌落计数的要求计数，图1中应选择105倍稀释度的菌液计数，结果才准确可靠．据图可得出每克土样中解磷菌株的活菌数为3.6×l06．
    （2）图2中，依次进行的划线的四个区域的面积要求为A＜B＜C＜D，D区面积最大的原因是使该区出现大量的单个菌落以便挑选纯化（或便于菌种分散），注意D区划线，不要与A（或A、B）（填字母）区相连．
    （3）为了筛选出所需菌株，培养基中唯一的磷源应该是难溶性磷酸盐．培养基上出现的单一菌落可以看作一个种群（填“种群”“群落”或“生态系统”．）根据实验结果可以确定熔解磷能力最强的菌株是B3-5-6．

    分析 分析题意可知，“透明圈直径（D）与菌落直径（d）的比值（$\frac{D}{d}$）代表微生物溶解磷的能力大小”，结合表格可知，菌株乙的比值（$\frac{D}{d}$）最大，说明菌株乙的溶解磷的能力最大．

    解答 解：（1）步骤1的目的是从土壤微生物中筛选解磷菌株，由于土壤样液中微生物种类和数量多，因此，最好采用稀释涂布平板法进行接种，从而分离得到解磷菌株．为了保证实验结果准确可靠，一般选择菌落数为30-300之间的平板进行计数，同时为避免偶然因素对实验结果的影响，应选择3个及其以上的平板进行统计取其平均值，故图1中应选择以105倍稀释度的菌液计数，结果才准确可靠．据图可知，在105稀释度下，0.1 mL稀释液中的菌落数为（32+39+37）÷3=36，所以每克土样中解磷菌株的活菌数为36×105+0.1+10=3.6×106（个/克）．
    （2）步骤2中采用平板划线法进一步筛选解磷能力强的菌株，故图2中依次进行划线的四个区域的面积要求为A＜B＜C＜D，D区面积最大的原因是使D区域出现大量的单个菌落以供挑选纯化（或便于菌种分散）．采用平板划线法纯化细菌时，要注意不能将最后一区的划线与第一区相连，即D区划线不要与A（或A、B）区相连．
    （3）据题可知，培养基中唯一的磷源应是难溶性磷酸盐．据种群的概念，在一定的自然区域内，同种生物的全部个体形成种群，故培养基上出观的单一菌落可以看做一个种群．根据实验原理中“透明圈直径（D）与菌落直径（d）的比值（D/d）代表微生物溶解磷的能力大小”，结合表格数据可以确定解磷能力最强的菌株是 B3-5-6．
    故答案为：
    （1）稀释涂布平板  105  3.6×l06
    （2）使该区出现大量的单个菌落以便挑选纯化（或便于菌种分散）  A（或A、B）
    （3）难溶性磷酸盐   种群    B3-5-6

    点评 本题结合实验表格结果考查了微生物培养和分离的有关知识，要求考生识记磷元素在土壤中的存在形式以及含磷的有机物，掌握微生物分离与纯化的方法，识记菌种的保藏的方法．

    练习册系列答案
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