Question

科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：

（1）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶＿＿＿＿＿＿＿＿分别对_____________________进行切割，切割后产生的DNA片段分别为＿＿＿种。

（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有＿＿＿＿＿＿＿＿作为标记基因。

（3）研究人员通常采用＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用＿＿＿＿＿＿＿＿技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。

（4）利用组织培养技术将导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄组织细胞培育成植株。图中③、④依次表示组织培养过程中番茄组织细胞的＿＿＿＿  ＿＿＿＿过程。

 

Answer 1

【答案】

（1）PstⅠ、SmaⅠ  含鱼抗冻蛋白基因的DNA、质粒 　4、2

（2）抗氨苄青霉素基因（ampr） （3）农杆菌转化（或基因枪法等，答案合理即给分） 　抗原—抗体杂交 　（4）脱分化、再分化

【解析】（1）为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，应选择双酶切，即选择PstⅠ、SmaⅠ。切割目的基因后产生DNA片段有4种，切割质粒后产生的DNA片段有2种。

（2）ampr为抗氨苄青霉素基因，属于标记基因。

（3）将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法等。检测目的基因是否翻译的方法是抗原－抗体杂交法。

（4）植物组织培养包括脱分化和再分经过程。