Question

10．人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得，生产流程如图所示．有关叙述正确的是（　　）

• A． 构建重组表达载体是需要用DNA聚合酶和DNA连接酶
• B． 检测目的基因是否已转录出mRNA，可采用分子杂交技术
• C． 将重组表达载体导入受精卵之前用CaCl ₂ 处理，有利于提高转化效率
• D． 若在母羊的体细胞中检测到htPA基因，说明目的基因成功表达

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：A、构建基因表达载体需要限制酶和DNA连接酶，不需要DNA聚合酶，A错误；
B、检测目的基因是否已转录出mRNA，可采用分子杂交技术，B正确；
C、将目的导入动物细胞最有效的方法是显微注射法，将目的基因导入微生物细胞时需要用CaCl ₂ 处理，C错误；
D、若在母羊的体细胞中检测到htPA基因，说明目的基因成功导入受体细胞，在转htPA基因母羊的羊乳中检测到htPA（或人组织纤溶酶原激活物），说明目的基因成功表达，D错误．
故选：B．

点评 本题结合转htPA基因母羊的培育过程图，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作工具及操作步骤，掌握各步骤中的相关细节，能结合所学的知识准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．