Question

【题目】图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

（1）若图2中目的基因D是人的α-抗胰蛋白酶的基因，现在要培养乳汁中含α-抗胰蛋白酶的羊，科学家要将该基因通过___________（方法）注入羊的_______________中，发育完全的母羊有可能分泌含α-抗胰蛋白酶的乳汁。

（2）基因工程技术中获得目的基因后，利用PCR技术将该基因扩增，前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成________________________________________

（3）图2中的目的基因D需要同时使用MetI和PstI才能获得，而图1所示的质粒没有限制酶MetI的酶切位点。所以在用该质粒和目的基因构建重组质粒时，需要对质粒进行改造，构建新的限制酶切位点。试帮助完成构建需要的限制酶切位点的过程（提供构建需要的所有条件）：首先用______酶处理质粒；然后用______处理质粒，使被切开的质粒末端链接上相应的脱氧核苷酸；再用______ 处理质粒形成限制酶切位点，它可被______识别。（供选答案如下：①EcoRI ②MetI ③PstI ④DNA连接酶 ⑤DNA聚合酶）

Answer 1

【答案】 显微注射法 受精卵 引物 1 5 4 2

【解析】试题分析：本题考查基因工程，考查对基因工程的工具、步骤的理解和识记。解答此题，应明确限制酶、DNA连接酶、DNA聚合酶的不同功能。

（1）培育转基因动物，应将目的基因和质粒连接而成的基因表达载体通过显微注射法注入羊的受精卵中中。。

（2）利用PCR技术扩增目的基因，需要根据目的基因的一段已知核苷酸序列合成引物。

（3）构建含有限制酶MetI酶切位点的质粒，首先用①EcoRI处理质粒；然后用⑤DNA聚合酶处理质粒，使被切开的质粒末端链接上相应的脱氧核苷酸；再用④DNA连接酶处理质粒，形成限制酶②MetI酶切位点。