Question

20．下面是将乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资料，请分析回答下列问题．资料1  巴斯德毕赤酵母菌是一种甲基营养型酵母菌，能将甲醇作为其唯一碳源，同时AOX1基因也会因受到诱导而表达．[5′AOX1和3′AOX1（TT）分别是基因AOX1的启动子和终止子]．
资料2  巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒，所以科学家改造出了图1所示的pPIC9K质粒用作载体，其与目的基因形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组，将目的基因整合于染色体中以实现表达．
（1）如果要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，需要用到DNA连接酶处理．
（2）获取HBsAg基因时，可利用从基因文库获取、人工合成、方法获取．
（3）构建的重组质粒中有5′AOX1、3′AOX1（TT）和HBsAg基因外，还应有标记基因．
（4）步骤1中的方法是Ga²⁺处理，此时的大肠杆菌处于感受态（易吸收外界DNA分子的状态）状态．
（5）为了确认巴斯德毕赤酵母菌转化是否成功，在培养基中应该加入卡拉霉素以便筛选，转化后的细胞
中是否含有HBsAg基因，可以用DNA分子杂交方法进行检测．
（6）与大肠杆菌等细菌相比，用巴斯德毕赤酵母菌细胞作为基因工程的受体细胞，其优点是在蛋白质合
成后，细胞可以对其进行加工（修饰）并分泌到细胞外，便于提取．

Answer 1

分析 分析题图：图中质粒含有SnaB、AvrⅡ、BglⅡ和SacI限制酶切割位点，其中SacI位于启动子上，BglⅡ位于终止子上．要将HBsAg基因和pPIC9K质粒重组，只能用限制酶SnaB和AvrⅡ切割质粒，要获取含有5′AOX1--3′AOX1段基因，应选用限制酶BglⅡ来切割．5′AOX1--3′AOX1段基因含有卡那霉素抗性基因，在培养基中加入卡那霉素以便筛选导入重组质粒的目的菌．

解答 解：（1）获取目的基因后，需要用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组质粒，并将其导入大肠杆菌以获取大量重组质粒．
（2）获取目的基因时，可利用从基因文库获取、人工合成等方法获取．
（3）基因表达载体包括启动子、终止子、目的基因和标记基因．
（4）在目的基因导入细菌细胞内时，需要用Ga²⁺处理，此时的大肠杆菌处于感受态（易吸收外界DNA分子的状态）状态．
（5）转化后的细胞中是否含有HBsAg基因，可以用DNA分子杂交方法进行检测．
（6）细菌是原核生物，只含核糖体一种细胞器，而酵母菌是真核生物，除含有核糖体外，还含有内质网、高尔基体等细胞器．所以与细菌相比，用巴斯德毕赤酵母菌细胞作为基因工程的受体细胞，其优点是在蛋白质合成后，细胞可以对其进行加工（修饰）并分泌到细胞外，便于提取．
故答案为：
（1）DNA连接酶
（2）从基因文库获取、人工合成
（3）标记基因
（4）Ga²⁺处理    感受态（易吸收外界DNA分子的状态）
（5）DNA分子杂交
（6）加工（修饰）

点评 本题结合工程菌形成过程，考查基因工程的相关知识，意在考查考生分析题图获取有效信息的能力；理解所学知识要点，把握知识间联系的能力；能运用所学知识解决生物学问题的能力和应用能力．