Question

（每空1分，共9分）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

（1）一个图1所示的质粒分子经Sma Ⅰ切割后有       个游离的磷酸基团，若用EcoR I切割图2所示外源DNA，可得     个DNA片段。
（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越       ，原因是                                    。
（3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是          。
（4）与只使用EcoR I相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止                                 。
（5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入       酶。
（6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了                             。
（7）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在                                的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。

Answer 1

（每空1空，共9分）
（1）2    3
（2）高   SmaI酶切位点都由G和C碱基组成，且G和C碱基间有三个氢键。
（3）SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因
（4）质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化
（5）DNA连接
（6）鉴别和筛选含有目的基因的细胞
（7）以蔗糖为唯一碳源

解析