Question

20．基因工程基本操作流程如图，请据图分析回答：
（1）图中A是运载体；在基因工程中，需要在限制性核酸内切酶酶的作用下才能完成剪切过程，过程②的所需要的酶拼接的化学键是磷酸二酯键
（2）过程③若导入的是动物细胞则使用的方法应该是：显微注射技术，若导入双子叶植物细胞最常用的方法是：农杆菌转化法．
（3）目的基因导入到受体细胞后，需要进行目的基因的检测与鉴定，如果要检测转基因生物染色体上是否插入了目的基因，一般使用DNA分子杂交技术进行检测．

Answer 1

分析 1、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
2、分析题图：图示是基因工程的基本操作流程，其中A为运载体；①目的基因的获取，②基因表达载体的构建，③将目的基因导人受体细胞，④目的基因的检测与鉴定．

解答 解：（1）分析图解，基因工程中需要将目的基因和运载体构建成重组质粒，因此图中A是运载体；在基因工程中，需要在限制酶的作用下才能完成剪切过程；过程②需要DNA连接酶，该酶拼接的是磷酸二酯键．
（2）将目的基因导入动物细胞最有效的方法是纤维注射法；将目的基因导入双子叶植物最有效的方法是农杆菌转化法．
（3）检测目的基因是否导入受体细胞，常用DNA分子杂交技术．
故答案为：
（1）运载体    限制性核酸内切酶      磷酸二酯键
（2）显微注射技术      农杆菌转化法
（3）DNA分子杂交

点评 本题结合基因工程的基本操作流程图，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、工具、操作步骤及应用；明确目的基因可以在受体细胞中得到表达的生理基础．