Question

4．为获取可降解高盐度工业废水中有机物的耐盐菌，研究人员进行了如下实验：
①制备含3% NaCl的固体培养基，以及含3010、5%和7% NaCl以高盐度工业废水中有机物为碳源的液体培养基；
②将高盐度废水采用平板划线法接种子含3% NaCl的固体培养基，如图一．然后置于适宜条件下培养一段时间，观察形成的菌落特征；
③将分离纯化后的菌株接种到固体斜面培养基上，适宜条件下培养适当时间，将试管置于4℃冰箱中保藏待用；
④取固体斜面上的菌株制成菌液，取等量菌液，分别加入到步骤①中制备的3组液体培养基中摇床培养35小时，定时取样统计活菌数目．测定结果如图二所示．

回答下列问题：
（1）配制培养基时，灭菌、添加NaCl溶液和调节pH的先后顺序是添加NaCI溶液、调节pH、灭菌．
（2）步骤②平板划线操作过程中，第一次划线前灼烧接种环的目的是防止杂菌污染，第二次及之后的几次划线前灼烧接种环的目的是杀死上次划线后接种环上残留的菌种（使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端）．完成图一所示操作，至少需要灼烧接种环6次．
（3）步骤④中常采用稀释涂布平板法法统计活菌数目．直接从静置的培养液中取样计数的做法是错误的，正确的操作是将培养液摇匀后取样计数．若每种浓度设3个重复实验，每次统计活菌数目时，需要从9个培养瓶中取样．
（4）由图二可知，该耐盐菌最适合处理含3%（浓度）NaCl的废水．用该耐盐菌处理较高盐度工业废水时，需要适当延长处理时间（增大接种量）（合理措施），才能达到理想效果．

Answer 1

分析 1、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
2、实验室常用的灭菌方法
①灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌；
②干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌；
③高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100 kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30 min．

解答 解：（1）配制培养基时，需待各种营养成分配制完成后再调节pH，最后进行灭菌．
（2）平板划线操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；划线操作结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者．由于图1中有5次划线，每次划线完需灼烧，再加上第一步灼烧，故完成图一所示操作，至少需要灼烧接种环6次．
（3）据试验操作可知，步骤④中常采用稀释涂布平板法统计活菌数目．取样时不能直接从静置的培养液中取样计数，需将培养液摇匀后取样计数．由于每种浓度设3个重复实验，共有3种不同浓度，故每次统计活菌数目时，需要从9个培养瓶中取样．
（4）由图二可知，该耐盐菌 在3% NaCl最多，故最适合处理含 3% NaCl的废水．用该耐盐菌处理较高盐度工业废水时，需要适当延长处理时间，以增大接种量，才能达到理想效果．
故答案为：
（1）添加NaCI溶液、调节pH、灭菌
（2）杀死上次划线后接种环上残留的菌种（使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端）    6
（3）稀释涂布平板法     将培养液摇匀后取样计数    9
（4）3%  适当延长处理时间（增大接种量）

点评 本题考查微生物的分离与培养、培养基的配制以及消毒和灭菌等有关方面的知识，意在考查学生对相关实验的实验原理、步骤、操作技能的掌握情况．