Question

【题目】如图为绿色荧光小鼠制备流程图，Gfp是绿色荧光蛋白基因，请分析回答：

(1)构建表达载体需要的酶是：__________________________________，表达载体包含绿色荧光蛋白基因Gfp、_______、_____________、终止子和复制原点等。

(2)图中载体上的Neo基因是一种抗生素抗性基因，图中步骤③所用的G418是一种抗生素(对细胞有毒害作用)，添加G418的目的是______________________。

(3)图中所用的胚胎干细胞来自___________________________。

(4)图中步骤⑤要将细胞注射入图中囊胚的________位置，图中步骤⑥胚胎移植前要对代孕母鼠用激素处理，目的是________。

(5)可以使用________方法在蛋白质水平上鉴定小鼠是否存在绿色荧光蛋白。

Answer 1

【答案】 限制性核酸内切酶、DNA连接酶 标记基因 启动子 筛选出导入目的基因的胚胎干细胞 早期胚胎或原始性腺 内细胞团 同期发情处理 抗原—抗体杂交

【解析】(1)构建表达载体需要的酶有限制性核酸内切酶和DNA连接酶，需要用限制性核酸内切酶将目的基因和运载体切开，然后用DNA连接酶将目的基因和运载体连接起来。表达载体包含目的基因绿色荧光蛋白基因Gfp、终止子和复制原点外还需要有启动子和标记基因。

（2）因为重组质粒中含有抗生素的抗性基因，所以在步骤③添加G418的目的是筛选出导入目的基因的胚胎干细胞。

（3）胚胎干细胞的来源有两个，早期胚胎或原始性腺。

（4）步骤⑤导入受体细胞使要将细胞注射入图中囊胚的内细胞团，因为它具有发育的全能性。图中步骤⑥胚胎移植前要对代孕母鼠用激素处理，目的是进行同期发情处理，使生理状况相同。

（5）在蛋白质水平上检测目的基因是否表达利用抗原-抗体杂交技术，如果出现杂交带说明表达成功。