Question

8．人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，研究者将获取的人htPA基因与质粒重组后导入到羊的受精卵中，再通过一系列早期胚胎培养和胚胎移植技术获得转htPA基因母羊，该转基因羊的羊乳中可获得研究所需的药用蛋白．请结合所学知识回答下列问题：
（1）以人的基因组DNA作模板，利用引物在体外复制htPA基因的技术被称为PCR技术，用同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）切割htPA基因与载体后，用DNA连接酶连接，可以构建基因表达载体．检测目的基因是否已插入受体细胞DNA中，可采用DNA分子杂交（或核酸探针）技术．
（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素使其超数排卵．采集的精子需要经过获能（处理），才具备受精能力．
（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是显微注射法．为了获得更多母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定（或胚胎检查）．利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，分割胚胎时要注意将内细胞团均等分割．
（4）若在转ht-PA基因母羊的羊乳中检测到htPA（或人组织纤溶酶原激活物），说明目的基因成功表达．
（5）这种通过分泌乳汁生产药用蛋白的转基因羊被称为乳腺（或乳房）生物反应器．

Answer 1

分析 DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体．
目的基因分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．
该基因工程需要对羊的性别进行选择，由于只有母羊能够分泌乳汁，因此选择母羊的胚胎进行移植．

解答 解：（1）体外扩增基因常用PCR技术，htPA基因与载体需要用同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）切割，形成相同的黏性末端，然后再通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体．检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用DNA分子杂交（或核酸探针）技术．
（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其超数排卵．采集的精子需要经过获能（处理），才具备受精能力．
（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是显微注射法．为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定，以选择母羊的胚胎进行移植．利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的全能性，分割胚胎时要注意将内细胞团均等分割．
（4）若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到htPA（或人组织纤溶酶原激活物），说明目的基因成功表达．
（5）这种通过分泌乳汁生产药用蛋白的转基因羊被称为乳腺（或乳房）生物反应器．
故答案为：
（1）PCR  同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）    DNA分子杂交（或核酸探针）
（2）促性腺激素    获能（处理）
（3）显微注射法    性别鉴定（或胚胎检查）    内细胞团
（4）htPA（或人组织纤溶酶原激活物）
（5）乳腺（或乳房）生物反应器

点评 本题考查了基因工程和胚胎工程的相关知识，要求考生能够识记基因工程的操作步骤；明确该基因工程中需要选择母羊进行胚胎移植；识记细胞全能性的概念等．要求考生具有扎实的基础知识，难度适中，属于考纲中识记、理解层次的考查．