Question

15．（1）在农业生产中发现一种广泛使用的除草剂（含氮有机化合物）在土壤中不易降解，长期使用可污染土壤．为修复被该除草剂污染的土壤，需要选育能高效降解该除草剂的细菌．
请完成下列选育的实验方案：
步骤一：菌种浸出液的制备：
从使用过除草剂的土壤中获取一定量的样本，然后置于无菌水中，震荡一定时间，备用．
步骤二：配置菌种选育培养基并灭菌：
所配制的培养基的特点是固体 和含不同浓度除草剂．
步骤三：
①划线接种
②在适宜的温度等条件进行倒置培养一定时间．
③观察选取在较高浓度下除草剂的培养基中大菌落．
（2）某同学在纯化菌株时，划线接种后一段时间后，平板的第一划线区域长满致密的菌苔，第二划线区域无菌落，造成划线无菌落可能的操作失误是接种环灼烧后未冷却或接种划线未从第一区域开始．

Answer 1

分析 1、平板划线的操作的基本步骤是：
（1）右手持接种环，经火焰灭菌，待凉后，在火焰旁打开盛有菌液的试管棉塞，并将试管口过火焰，将以冷却的接种环伸入菌液，沾取一环菌液，将试管口过火焰丙塞上棉塞．
（2）左手斜持琼脂平板，皿盖打开一条缝，右手于火焰近处將接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖，接种环不应划破培养基表面．
（3）烧灼接种环，杀灭环上残留菌液，待冷却（是否冷却，可先在培养基边缘处试触，若琼脂溶化，表示未凉，稍等再试），从第一区域划线的末端开始往第二区内划线，重复以上操作，在第三四五区内划线，注意不要将最后一区的划线与第一区相连．
（4）将平板倒置，放入培养箱中培养．
2、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
3、消毒和灭菌

	消毒	灭菌
概念	使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒法	灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌
适用对象	操作空间、某些液体、双手等	接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等

解答 解：（1）步骤一：由于该除草剂为含氮有机物，所以筛选能高效降解该除草剂的细菌，应在使用过除草剂的土壤取样，并使用含该除草剂为唯一氮源的选择培养基．
步骤二：所配制的培养基为固体培养基并需要配置含不同浓度除草剂的培养基．
步骤三：①划线接种．
②接种后应该进行培养，即在适宜的温度等条件进行倒置培养一定时间．
③观察选取在较高浓度下除草剂的培养基中大菌落．
（2）根据题意分析，该同学的失误是接种环灼烧后未冷却造成菌种烫死，或接种划线未从第一区域开始，这样会导致二次划线起始时就没有菌种．
故答案为：
（1）使用过除草剂的土壤     固体   含不同浓度除草剂
②在适宜的温度等条件进行倒置培养一定时间
③观察选取在较高浓度下除草剂的培养基中大菌落
（2）接种环灼烧后未冷却或接种划线未从第一区域开始

点评 本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记无菌技术；识记培养基的成分、类型及功能；识记接种微生物常用的两种方法，能结合图中信息准确答题．