Question

【题目】复合型免疫缺乏症患者由于缺少腺苷酸脱氨酶基因（ada基因）而导致免疫功能 缺损。科学家将正常人的ada基因转人患者的T细胞中，再将携带ada基因的T细胞 注入患者体内，可以改善患者的免疫功能。回答下列问题：

（1）从正常人的T细胞中获取总RNA，在___________酶的作用下合成cDNA，在cDNA 中还需要筛选才能获得ada基因，其原因是___________。

（2）根据ada基因两端的核苷酸序列合成___________，并通过___________技术对目的基因进行筛选和扩增。在扩增过程中首先要进行90-95℃保温，其目的是___________。

（3）上述治疗方法属于___________（填“体内基因治疗”或“体外基因治疗”），将人正常的ada基因导人到患者的T细胞时，需要构建基因表达载体，其目的是___________。

Answer 1

【答案】逆转录 T细胞中有多种基因进行表达 引物 PCR 使DNA解旋 体外基因治疗 使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用

【解析】

1、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因—DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA—分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质—抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
2、基因治疗的种类：体外基因治疗和体内基因治疗（注意两者的区别），其中效果比较可靠的是体外基因治疗。
（1）体外基因治疗：先从病人体内获得某种细胞进行培养，然后再体外完成转移，再筛选成功转移的细胞增植培养，最后重新输入患者体内，如腺苷酸脱氨酶基因的转移。
（2）体内基因治疗：用基因工程的方法直接向人体组织细胞中转移基因的方法。

（1）以RNA为模板合成DNA的过程为逆转录过程，需要逆转录酶的催化；T细胞中有多种基因进行表达，如ada基因，因此T细胞中的总RNA逆转录形成的cDNA中含有ada。
（2）根据ada基因两端的核苷酸序列合成引物，并通过PCR技术对目的基因进行筛选和扩增。在扩增过程中首先要进行90～95℃保温，其目的是使DNA解旋。
（3）先从病人体内获得某种细胞进行培养，然后再体外完成转移，再筛选成功转移的细胞增植培养，最后重新输入患者体内，这属于体外基因治疗。构建基因表达载体的目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。