Question

6．淀粉分解菌是能分解淀粉的一类微生物，在自然条件下，淀粉分解菌和其他各种细菌混杂生活在土壤中．某实验小组利用培养基将土壤中的淀粉分解菌筛选出来，回答下列问题：
（1）将土壤中的淀粉分解菌筛选出来的培养基应添加淀粉作为唯一的碳源．若要配制为固体培养基，还要加入琼脂作为凝固剂．
（2）在淀粉分解菌的培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行灭菌（消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和消毒（消毒、灭菌）．
（3）稀释涂布平板法可用于微生物的接种和计数，该实验小组将样液分别稀释了10倍、10²  倍、10³ 倍、10⁴ 倍，然后将10² 倍、10³ 倍、10⁴倍的稀释液分别涂布在不同的平板上．若有三个平板均涂布了稀释倍数为10³ 倍的稀释液1 mL，分别形成了 68、70和72个菌落，则样液中每毫升含有淀粉分解菌7×10⁴个，该方法测量值一般比实际值小（低、少）．
（4）涂布一段时间后，待长出菌落后可向培养基中滴入碘液，菌落周围出现透明圈的，就是目的菌株．
（5）根据以上实验分析，要减少平板菌落计数产生的误差，可采取什么措施（答出一项即可）？

Answer 1

分析 1、培养基的营养构成
①各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐；
②不同培养基还要满足不同微生物对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．
2、检测土壤中细菌总数，可以看出采用的计数方法是稀释涂布平板法进行计数．用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数时，在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，选择菌落数在30～300的进行记数，求其平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数．

解答 解：（1）要将土壤中的淀粉分解菌筛选出来，培养基应添加淀粉作为唯一的碳源．若要配制为固体培养基，还要加入琼脂作为凝固剂．
（2）为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行灭菌；操作者的双手需要进行清洗和消毒．
（3）涂布多个稀释倍数的稀释液的目的是稀释平板法培养出微生物的单个菌落，达到纯培养的目的．由题意知1ml原样液中的菌落数是$\frac{68+70+72}{3}$×10³=7×10⁴个．稀释涂布平板得到的菌落可能存在两个或多个细菌细胞长成一个菌落，使该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要低．
（4）碘液可以鉴定淀粉产生蓝色反应，涂布一段时间后，待长出菌落后可向培养基中滴入碘液，菌落周围出现透明圈的，说明淀粉被分解，则该菌落就是目的菌株．
（5）要减少平板菌落计数产生的误差，至少涂布3个平板，作为重复组（设置重复组）；样品的稀释倍数要合适（选择菌落数在30～300的平板进行计数）；设置不接种的培养基作为空白对照，确认培养基不受污染．
故答案为：
（1）淀粉         琼脂 
（2）灭菌        消毒 
（3）7×10⁴         小（低、少）
（4）透明圈  
（5）至少涂布3个平板，作为重复组（设置重复组）；样品的稀释倍数要合适（选择菌落数在30～300的平板进行计数）；设置不接种的培养基作为空白对照，确认培养基不受污染

点评 本题考查了微生物的分离与培养的有关知识，要求考生识记培养基的成分以及制备方法，识记无菌技术的主要内容，掌握微生物分离与计数的方法等，同时要求考生具有一定的实验技能．