Question

“基因靶向”技术，指的是应用DNA同源重组原理，通过一定的载体，用设计好的目的基因替代靶基因，从而达到使靶基因功能丧失的目的。借助这一技术，科学家可以用小鼠进行实验，使其体内的某项特定基因丧失功能，以帮助人们找到治疗疾病的有效方法。下面是该实验的基本过程，请回答有关问题：
(1)获取目的基因。
①经过修饰使靶基因的功能改变或丧失就可获得目的基因。如果要获得活性降低了的X酶蛋白的目的基因，可以根据此蛋白的结构及功能进行X酶基因的改造，这一技术叫做___________。
②为了提高实验成功率，需要通过_________技术扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝。
(2)构建基因表达载体。一个基因表达载体的组成，除了目的基因以外，还必须有________基因，以便于细胞的筛选。质粒具有的一至多个__________位点，使目的基因插入其中成为可能，因此常被选作运载体。
(3)将基因表达载体导入ES细胞，并从中筛选，然后培育出小鼠。
①由ES细胞培育出小鼠的过程中，主要应用了________技术和________技术。
②为了确定该小鼠体内是否成功发生了基因的同源重组，可通过观察小鼠的性状来检测，这属于________水平的鉴定。
③获得胚胎干细胞(ES细胞)。实验一般采用ES细胞作为目的基因的受体细胞，这是因为ES细胞具有_________。请举出一例获取ES细胞的常用方法：_____________。
(4)上述基因工程过程中，属于核心步骤的是____________。

Answer 1

(1)①蛋白工程；②PCR
(2)标记；限制酶切割
(3)①早期胚胎培养；胚胎移植②个体③全能性；从早期胚胎(囊胚内细胞团)中分离，从胎儿的原始性腺中分离、通过核移植技术培育得到(任答一例)
(4)构建基因表达载体