Question

【题目】2011年中国农业大学获得了表达TLR4基因的抗病绵羊，这种转基因绵羊加大了对病原体的清除能力。如图为该TLR4转基因克隆羊的培育过程示意图，请据图回答下列问题：

（1）②过程中是将重组质粒而不是将目的基因直接导入受体细胞的原因是_________。促进重组质粒进入受体细胞与质粒上的______基因有关。羊胚胎成纤维细胞是否已经导入目的基因的筛选方法有______（答出两点）。

（2）羊胎儿成纤维细胞培养过程中，细胞贴壁生长，数量不断增多，往往会发生______现象，此时，需要用胰蛋白酶消化组织中的______和细胞外的其他成分，获得单个的成纤维细胞悬浮液。

（3）③过程中需要对羊胚胎成纤维细胞进行______的特殊处理，再取出细胞核，这有利于细胞核的一系列变化和细胞融合后______的启动。

Answer 1

【答案】因为直接导入，目的基因无法在受体细胞中复制增殖和稳定存在 控制质粒DNA转移的 根据标记基因筛选、DNA杂交技术筛选 接触抑制 胶原纤维 营养限制性培养（或调节培养基中的牛血清浓度） 基因表达的分子开关

【解析】

1.基因表达载体的构建是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。其目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。

2.目的基因的检测与鉴定的方法：检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，用DNA分子杂交技术；检测目的基因是否转录出了mRNA，用分子杂交技术；检测目的基因是否翻译成蛋白质，用抗原-抗体杂交技术。

3.动物细胞培养过程中，细胞进行有丝分裂，数量不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。贴满瓶壁的细胞需要用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖。

（1）将目的基因导入受体细胞时，必须先构建基因表达载体，因为直接导入受体细胞，目的基因无法在受体细胞中复制增殖和稳定存在，不能传给下一代；促进重组质粒进入受体细胞与质粒上的控制质粒DNA转移的基因有关，该基因能将插入的目的基因序列转移并整合到生物的染色体上；检测目的基因是否导入受体细胞羊胚胎成纤维细胞时，可根据质粒上的抗生素抗性标记进行筛选，也可用DNA分子杂交技术进行筛选，将单链的目的基因片段用放射性同位素标记，进行DNA分子杂交。

（2）在动物细胞培养过程中，细胞贴壁生长，数量不断增多，当细胞生长到表面相互接触时，往往会发生接触抑制现象；故需要用胰蛋白酶消化组织细胞中的胶原纤维和细胞外的其他成分，获得单个的成纤维细胞悬浮液。

（3）③过程表示取出供体细胞核，进一步进行细胞核移植，需要对羊胚胎成纤维细胞进行营养限制性培养（或调节培养基中的牛血清浓度）的特殊处理，再取出细胞核，这有利于细胞核内基因的选择性表达，即有利于细胞核的一系列变化和细胞融合后基因表达的分子开关的启动。