Question

【题目】检测大肠杆菌相对数量的方法有多种，请回答下列与大肠杆菌相关的知识：

（1）急性肠胃炎是由细菌通过消化道进入人体导致的。因此检验饮用水中大肠杆菌含量是有效监控疾病发生的必要措施。检验大肠杆菌的含量时，通常将水样通过滤膜法过滤后再进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样接种到含___________的琼脂固体基本培养基的表面进行培养，记录________(颜色)菌落的数量，这种计数方法称为_____ 。

（2）已知大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，现提供足量的已灭菌乳糖蛋白胨培养液和具塞试管，应如何判断待检水样中是否含有大肠杆菌?请写出大致的实验思路。

________________ 。

（3）杯碟法(如下图)是在接种有试验菌的琼脂平板上放上玻璃或不锈钢的无底小杯(常称牛津杯)，向杯内滴人待测的拮抗菌发酵液，保温培养，抗生素由小杯渗透到周围的琼脂中，抑制细菌生长，因此在小杯周围会形成一个透明圈，圈的直径决定于抗生素的浓度。人们将含有青霉素酰化酶的大肠杆菌细胞进行固定化，用于大规模地生产青霉素母核(青霉素的主体化学结构部分)，然后再对母核的侧链进行化学修饰，可以得到青霉素。请回答：

对大肠杆菌细胞进行固定时，常采用的方法是______________，原因为__________。把同一种大肠杆菌在5种不同条件下通过液体培养基培养相同的时间之后，再在相同的条件下通过一系列的方法提取到青霉素，滴入相同体积的提取液到上图的杯碟内，通过透明圈的大小可比较各种条件下大肠杆菌的相对值，其中大肠杆菌数量相对最高的是___号。

Answer 1

【答案】伊红美蓝 黑色 稀释涂布平板法 通过无菌操作向试管内注入一定量待检水样，再注入已灭菌的乳糖蛋白胨培养液将试管充满，塞上塞子，混匀后置于37℃恒温箱培养24 h。若试管内有气泡生成，且pH值也降低 包埋法 细胞体积大，难以被吸附或结合，且包埋之后，不容易从网格中漏出 5

【解析】

接种微生物的方法主要有平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法可以对微生物进行计数和统计。在鉴别大肠杆菌的时候，经常使用伊红美蓝试剂，其可以将大肠杆菌鉴别为黑色。固定细胞的常用方法为包埋法。

（1）鉴别大肠杆菌时常常使用伊红美蓝试剂；其会将大肠杆菌鉴别为黑色，因此观察黑色菌落即可；这种计数方法为稀释涂布平板法，其可以根据平板上生长的菌落数进行数据的统计；

（2）由于大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，可以利用其产酸产气的特点进行鉴别，通过无菌操作向试管内注入一定量待检水样，再注入已灭菌的乳糖蛋白胨培养液将试管充满，塞上塞子，混匀后置于37℃恒温箱培养24 h。若试管内有气泡生成，且pH值也降低，即可表明确实为大肠杆菌发酵；

（3）对细胞进行固定常用的方法为包埋法；由于细胞体积大，难以被吸附或结合，不适合使用吸附法和化学结合法，且包埋之后，细胞不容易从网格中漏出，因此常常使用包埋法；由于题干中表明这种方法会使“小杯周围会形成一个透明圈，圈的直径决定于抗生素的浓度”所以5的透明圈最大，表明产生的抗生素浓度最大，即大肠杆菌的相对数量最多。