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回答下列(一)、(二)小题:

(一)普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱,有人将地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶基因转入酵母菌中,经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种(过程如图1所示)

(1)图1中,为达到筛选目的,平板内的固体培养基应以____________作为唯一碳源。②、③过程需重复几次,目的是______________。

(2)某同学尝试过程③的操作,其中一个平板经培养后的菌落分布如图2所示。该同学的接种方法是_______;推测该同学接种时可能的操作失误是____________。

(3)以淀粉为原料,用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵,发酵罐需要先排气,其原因是______________。

(4)上述工程酵母菌培养过程中,有关操作正确的是( )

A.玻璃刮刀用火焰灼烧进行灭菌

B.培养基分装到培养皿后进行灭菌

C.倒平板和取菌液都必须在酒精灯火焰旁进行

D.获得的菌种如果需要保存,可置于37℃恒温保存

(二)下表是几种限制酶识别序列及其切割位点,图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点,其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题:

(1)用图中质粒和目的基因构建重组质粒,应选用_______________________两种限制酶切割,酶切后的载体和目的基因片段,通过_______________酶作用后获得重组质粒。

(2)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌,应在筛选平板培养基中添加______________。

(3)若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接,连接部位的6个碱基对序列为_______________,对于该部位,这两种酶__________________(填“都能”、“都不能”或“只有一种能”)切开。

(4)若用Sau3A I切图1质粒最多可能获得_______________种大小不同的DNA片段。

(5)基因工程中,某些噬菌体经改造后可以作为载体,其DNA复制所需的原料来自于______________。

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